[发明专利]用于抑制二化螟生长的利用acy1-CoA desaturase SexiVPAE基因的双链RNA的合成方法

摘要

一种二化螟acyl-CoA desaturase SexiVPAE基因片段的dsRNA的合成方法，包括：根据二化螟acyl-CoA desaturase SexiVPAE基因的cDNA克隆序列设计相应PCR引物；通过PCR的方法扩增acyl-CoA desaturase SexiVPAE基因的cDNA片段，并在体外转录合成dsRNA；将dsRNA添加到二化螟人工饲料中，用含有dsRNA的人工饲料喂饲二化螟。人工喂饲研究表明，较高浓度的dsRNA可以显著增加二化螟幼虫的死亡率并抑制其生长，该结果为进一步利用该dsRNA序列在生产上有效控制二化奠定了重要基础。

主权项

1.一种二化螟acyl-CoA desaturase SexiVPAE基因片段的dsRNA的合成方法，包括：(1)根据二化螟acyl-CoA desaturase SexiVPAE基因的cDNA克隆的序列，设计其PCR扩增的上游引物P1和下游引物P2；(2)在P1和P2上分别添加T7启动子序列“TAATACGACTCACTATAGG”构成引物P3和P4；(3)以二化螟acyl-CoA desaturase SexiVPAE基因的cDNA克隆为模板，用P1+P4和P2+P3引物对，分别进行两个PCR反应，获得T7启动子在其上游或下游的两种不同PCR产物；(4)两种PCR产物采用SV Gel和PCR Clean-Up System试剂盒进行回收纯化；(5)以回收的两种PCR产物为模板，利用T7RiboMAX^TM Express RNAi System试剂盒分别进行体外RNA的转录；(6)将分别转录的RNA等体积进行混合，70℃变性10min，然后缓慢冷却至室温以形成dsRNA，然后加入DNase和RNase降解DNA和单链RNA，最后对dsRNA进行纯化。