[发明专利]在DNA分子的环化中仅选择由单分子形成的环化DNA的方法

摘要

本发明提供一种具有特定结构的环状DNA分子的制作方法，该特定结构能够辨别由单个DNA分子形成的环状DNA(单分子环状DNA)和由多个DNA分子形成的环状DNA(多分子环状DNA)及来自于多分子环状DNA的单分子环状DNA。根据本发明，能够在环状DNA的制作中仅选择不来自于多分子环状DNA的单分子环状DNA。

主权项

一种环状DNA分子的集团的制作方法，是能够从由该方法制作的环状DNA分子的集团中仅选择不来自于多分子环状DNA的单分子环状DNA的方法，包括以下工序：1)使第一步环化用衔接头(A)与各目标DNA分子的一末端结合并使包含衔接头(b)和所述衔接头(A)的第二步环化用衔接头(B)与另一末端结合的工序，其中，衔接头(B)介由衔接头(b)侧与DNA分子结合，衔接头(B)中的衔接头(A)位于DNA分子与衔接头(b)的键的外侧，其中，衔接头(A)包含切割位点，所述切割位点产生与任意衔接头(A)的切割末端均非特异性结合的切割末端，衔接头(b)包含2个对每个该衔接头(b)而言不同的固有序列，这2个固有序列是在相同方向或相反方向取向的相同序列，并且，衔接头(b)在这2个固有序列之间包含切割位点，所述切割位点产生与任意衔接头(b)的切割末端均非特异性结合的切割末端，该切割位点在切割衔接头(A)的切割位点时不被切割，且产生不与衔接头(A)的切割末端结合的切割末端；2)第一切割工序，在衔接头(A)的切割位点切割工序1)中得到的DNA分子；3)第一步环化工序，使工序2)中得到的DNA分子的两个末端结合而环化；4)除去工序3)中未环化的线性DNA分子的工序；5)第二切割工序，在衔接头(b)的切割位点切割工序3)和工序4)中得到的环状DNA分子；以及6)第二步环化工序，使工序5)中得到的DNA分子的两个末端结合而环化，其中，对衔接头(b)部分的序列进行序列确定，如果衔接头(b)部分所含的2个固有序列相同，则判定工序6)中得到的环状DNA分子为不来自于多分子环状DNA的单分子环状DNA，如果这2个固有序列不同，则判定工序6)中得到的环状DNA分子为多分子环状DNA或者来自于多分子环状DNA的单分子环状DNA。