[发明专利]一种以蕲蛇为原料提取Ⅱ型胶原蛋白的方法

摘要

本发明提供了一种以蕲蛇为原料提取Ⅱ型胶原蛋白的方法。所述方法包括：将蕲蛇粉末用盐酸胍-Tris-HCl混合溶液除去蛋白多糖；除去多糖后收集沉淀，用乙酸溶液溶解沉淀；溶液采用胃蛋白酶酶解释放Ⅱ型胶原蛋白；酶解液离心后取上清进行盐析充分沉淀Ⅱ型胶原蛋白；离心收集沉淀Ⅱ型胶原蛋白离心并用乙酸再次溶解，溶解液透析除胃蛋白酶和其他杂蛋白；透析袋中Ⅱ型胶原蛋白再次使用乙酸溶解并透析除去盐离子；将透析后的袋内液体低温冷冻真空干燥，得到蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白。本发明的有益效果主要体现在：本发明方法操作简单，制得Ⅱ型胶原蛋白纯度高。

主权项

一种以蕲蛇为原料提取Ⅱ型胶原蛋白的方法，所述方法包括：（1）蕲蛇粉末用盐酸胍‑Tris‑HCl混合溶液混悬，4~6℃搅拌24~30h，离心，去上清，沉淀用40~60 mM Tris‑HCl溶液洗涤除去盐酸胍；所述盐酸胍‑Tris‑HCl混合溶液中盐酸胍浓度为4~5M，Tris‑HCl浓度为40~60 mM；（2）步骤（1）所得沉淀用0.5~1 M乙酸水溶液重悬，以60~80%甲酸水溶液调节pH值为2~3，加入足量胃蛋白酶，4~6℃搅拌48~60h，离心，弃去沉淀；（3）步骤（2）得到上清液滴加5~6M NaCl溶液至NaCl浓度为0.8~0.9 M，4~6℃静置12~24h，离心，去除上清液；（4）步骤（3）得到沉淀用足量0.05~0.2 M乙酸溶解，转入截留分子量50000道尔顿的透析袋中、用20~30 mM Na2HPO4充分透析，所得沉淀再用足量0.05~0.2M乙酸溶解，转入截留分子量10000道尔顿的透析袋中、用0.05~0.2M乙酸溶液充分透析，所得液体真空干燥，得到所述Ⅱ型胶原蛋白的粉末。