[发明专利]杂交瘤细胞的培养方法

摘要

本发明涉及一种杂交瘤细胞的培养方法，包括如下步骤将杂交瘤细胞悬液接种到含有大孔微载体和培养基的搅拌瓶中并于搅拌条件下培养，得到生长于大孔微载体上的杂交瘤细胞；将生长于大孔微载体上的杂交瘤细胞在搅拌瓶中逐级放大培养，同时逐渐降低培养基中血清的含量直至为零，得到适应无血清培养基的杂交瘤细胞；采用连续灌流的培养方式培养，培养基为无血清生长型培养基，得到密度大于1×107细胞/mL的适应无血清培养基的杂交瘤细胞，即具有高细胞密度的杂交瘤细胞。

主权项

一种杂交瘤细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：将杂交瘤细胞悬液接种到含有大孔微载体和培养基的搅拌瓶中搅拌培养，得到生长于大孔微载体上的杂交瘤细胞，其中，接种密度为5×105细胞/mL，培养条件为：培养基的pH为7.0～7.2，培养基中血清的质量分数为5％，培养温度37℃，溶氧的质量分数为30％，CO2的质量分数为5％，培养基中大孔微载体的浓度为1.5g/L，搅拌速率为30转/分钟；培养5小时后，搅拌速率提升至50转/分钟，继续培养12小时；将生长于大孔微载体上的杂交瘤细胞在搅拌瓶中逐级放大培养，培养条件为温度37℃，pH为7.0～7.2，转速为60转/分钟，培养3天后，用新培养基置换搅拌瓶中一半的培养基，同时逐渐降低培养基中血清的含量直至为零，然后加入胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺、β巯基乙醇、氢化可的松、微量元素、氨基酸以及人重组白细胞介素IL‑6，继续培养，得到适应无血清培养基的杂交瘤细胞，培养基中胰岛素为5mg/L，转铁蛋白为5mg/L，乙醇胺为4mg/L，β巯基乙醇为2mg/L，氢化可的松为2μg/L，人重组白细胞介素IL‑6为400U/mL；当上述适应无血清培养基的杂交瘤细胞的密度达到1×106～1.2×106细胞/mL时，将所述适应无血清培养基的杂交瘤细胞接种到通气搅拌生物反应器中，采用连续灌流的培养方式培养，培养基为无血清生长型培养基，得到密度大于1×107细胞/mL的杂交瘤细胞，其中，通气搅拌生物反应器中预先加入了大孔微载体、培养基、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺、β巯基乙醇、氢化可的松、微量元素、氨基酸以及人重组白细胞介素IL‑6，培养条件为：培养基的pH为7.0，搅拌速率为80转/分钟，灌流速率为1.5升/天，溶氧的质量分数为30％，培养基中大孔微载体的浓度为2.5g/L；培养基中，胰岛素为5mg/L，转铁蛋白为5mg/L，乙醇胺为4mg/L，β巯基乙醇为2mg/L，氢化可的松为2μg/L，人重组白细胞介素IL‑6为400U/mL；在得到密度大于1×107细胞/mL的杂交瘤细胞后，采用连续灌流的培养方式于无血清表达型培养基中培养密度大于1×107细胞/mL的杂交瘤细胞；所述杂交瘤细胞为生产抗人A型血细胞表面抗原的单克隆抗体的鼠‑鼠杂交瘤细胞。