[发明专利]一种快速检测细胞中谷胱甘肽的方法有效
| 申请号： | 201210568880.3 | 申请日： | 2012-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN102978276A | 公开（公告）日： | 2013-03-20 |
| 发明（设计）人： | 陈燕婷 | 申请（专利权）人： | 陈燕婷 |
| 主分类号： | C12Q1/26 | 分类号： | C12Q1/26;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12N9/02;G01N21/33 |
| 代理公司： | 广西南宁汇博专利代理有限公司 45114 | 代理人： | 邓晓安 |
| 地址： | 530504 广西壮族自治*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种快速检测细胞中谷胱甘肽的方法，该方法的实现步骤包括：谷胱甘肽氧化还原酶GOR的基因克隆获得；利用基因工程手段构建谷胱甘肽氧化还原酶GOR的表达重组菌BL21/pET28α-GOR；诱导重组菌表达出GOR酶，重组菌细胞破碎，获得谷胱甘肽氧化还原酶酶液；检测样品制备；催化反应体系构建；可见分光光度计检测反应体系在波长为340nm处的变化曲线；谷胱甘肽浓度计算。本发明可应用于真菌类细胞、真核类细胞中谷胱甘肽含量的检测，检测方法具有样品处理简单，操作简便，检测时间短，灵敏度高，检测结构重复性高等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 细胞 谷胱甘肽 方法 | ||
【主权项】：
一种快速检测细胞中谷胱甘肽的方法，其特征在于，方法步骤包括1）谷胱甘肽氧化还原酶基因的PCR克隆，2）谷胱甘肽氧化还原酶重组表达菌构建，3）谷胱甘肽氧化还原酶重组表达菌诱导表达，4）谷胱甘肽氧化还原酶酶液获得，5）检测样品制备，6）反应催化体系构建，7）检测，8）计算谷胱甘肽浓度，所述谷胱甘肽氧化还原酶基因为序列表中的SEQ ID1；所述谷胱甘肽氧化还原酶基因的PCR克隆为设计PCR引物1和引物2，利用PCR技术对序列SEQ ID1进行克隆，引物1：5'GCGGGATCCATGACTAAACACTATG3'，引物2：5'GCGAAGCTTTTAACGCATTGTCACGA3'；所述反应催化体系构建为反应体系包括：谷胱甘肽氧化还原酶酶液1、含磷酸的缓冲溶液2、样品3；所述检测为采用紫外可见分光光度计检测反应催化体系在340nm处的吸收值A的变化。
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