[发明专利]一种从萝卜皮中分离制备四种天竺葵素衍生物的方法

摘要

本发明涉及一种从萝卜中分离制备四种高纯度酰基化花色苷单体的方法，所述方法以红皮白心或红皮红心萝卜为原料，通过将其削皮，浸提浓缩、除杂、大孔树脂纯化、凝胶纯化、结合半制备色谱的步骤，得到4种萝卜花色苷单体；所述方法操作简单，能有效从萝卜皮中分离得到4种高纯度的花色苷单体，其纯度分别为96.40％、97.80％、97.00％、98.34％，并且可实现大规模制备。

主权项

一种从萝卜皮中分离制备四种高纯度酰基化花色苷单体的方法，包括以下步骤：(1)原料预处理：将新鲜的萝卜洗净、剥皮，并将得到的萝卜皮切碎；(2)萝卜花色苷粗提浓缩液：将得到的萝卜皮，按照料液比1g∶2mL的比例加入0.01％(v/v)盐酸的甲醇溶液中，常温下，浸提，过滤，反复三次，然后合并滤液，在40‑45℃下真空旋转蒸发除去甲醇得到花色苷粗提液，按所述粗提液∶乙酸乙酯的体积比为1∶2的比例加入乙酸乙酯萃取，静置分层，萃取三次，收集合并水相，在40‑50℃下真空旋转充分蒸发除去乙酸乙酯，得到花色苷浸膏；将所述浸膏用少量的0.01％(v/v)盐酸的水溶液溶解，得到花色苷上样液；(3)大孔树脂吸附：将大孔吸附树脂装入层析柱中，用0.01％(v/v)盐酸的水溶液冲洗；将所述花色苷上样液以0.5BV/h的流速注入大孔树脂柱中，先用含0.01％的盐酸(v/v)的去离子水以1BV/h冲洗树脂，再用0.01％(v/v)的盐酸的甲醇溶液以1BV/h的洗脱，收集颜色明显的流出液，将收集到的洗脱液在40‑45℃下真空旋转蒸发除去甲醇，得到花色苷粗品；(4)凝胶纯化：将从大孔树脂纯化得到的花色苷粗品注入凝胶柱，用50％的甲醇水(v/v)洗脱，按照每10分钟接取一次，收集洗脱液，将收集到的洗脱液在40‑45℃下真空旋转蒸发除去甲醇，得到初步纯化的花色苷提取物；(5)单体制备：利用半制备色谱分离所述花色苷提取物，采用程序1，采用常规的C18制备色谱柱，柱温20‑40℃；DAD检测器：检测波长为520nm；根据出峰时间，依次收集到3‑[(6‑p‑香豆酰)‑D‑吡喃葡萄糖基‑(2→1)‑D‑吡喃葡萄糖苷]‑5‑D‑吡喃葡糖苷天竺葵素、3‑[(6‑阿魏酰)‑D‑吡喃葡萄糖基‑(2→1)‑D‑吡喃葡萄糖苷]‑5‑D‑吡喃葡糖苷天竺葵素、3‑[(6‑p‑香豆酰)‑D‑吡喃葡萄糖基‑(2→1)‑D‑吡喃葡萄糖苷]‑5‑[(6‑丙二酰)‑D‑吡喃葡糖苷]‑天竺葵素、3‑[(6‑阿魏酰)‑D‑吡喃葡萄糖基‑(2→1)‑D‑吡喃葡萄糖苷]‑5‑[(6‑丙二酰)‑D‑吡喃葡糖苷]‑天竺葵素四种花色苷单体；对首次分离得到的纯度较低的3‑[(6‑p‑香豆酰)‑D‑吡喃葡萄糖基‑(2→1)‑D‑吡喃葡萄糖苷]‑5‑D‑吡喃葡糖苷天竺葵素、3‑[(6‑阿魏酰)‑D‑吡喃葡萄糖基‑(2→1)‑D‑吡喃葡萄糖苷]‑5‑D‑吡喃葡糖苷天竺葵素再用程序2分别进行二次分离，得到纯度较高的花色苷单体；进一步浓缩，在40‑45℃下，真空旋转蒸发浓缩，得到所述四种花色苷单体；所述盐酸的浓度为12M，所述甲醇、所述乙酸乙酯、所述磷酸、所述甲酸和所述乙腈均为色谱纯。