[发明专利]一种用于检测鲫鱼肠道消化吸收率的基因分析方法

摘要

本发明公开了一种用于检测鲫鱼肠道消化吸收率的基因分析方法，以在鲫鱼肠道细胞中调控营养物质消化吸收的关键转录因子CDX2的表达作为分析鲫鱼消化吸收率的依据，根据其荧光定量PCR结果来进行分子水平的分析，既涵盖传统的消化吸收率评定方法，又提出了更为方便的基因分析来进行评定：选择鲫鱼肠道细胞中CDX2基因的定量表达结果与传统湿式灰化定量法测的鲫鱼表观消化率呈正相关作为评定依据。与传统方法相比，本发明可以从分子水平准确的对鲫鱼表观消化率和以后的肠道消化吸收潜能进行评定，方法简单、方便，能够为鲫鱼饲料配方优化提供技术支持。

主权项

一种用于检测鲫鱼肠道消化吸收率的基因分析方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取待检测的鲫鱼，解剖并分离出肠道，将肠道投入保存液中，以用于基因表达的分析；（2）提取第（1）步中的肠道总RNA；（3）反转录合成cDNA；（4）以第（3）步中的cDNA为模板，用CDX2引物进行PCR克隆，其中，CDX2引物的上游核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，下游核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；（5）实时荧光定量PCR检测，其中，目的基因引物为所述的CDX2引物，荧光定量内参基因引物为管家基因β‑Actin引物，该引物的上游核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；（6）定量PCR结束后，从扩增曲线得出Ct值，计算CDX2基因的表达量，CDX2基因的表达量=2‑ΔΔCt，其中ΔΔCt=(Ct目的基因‑Ct管家基因)‑ ΔCt校准样，根据CDX2基因的表达量来判断鲫鱼消化吸收率的高低，即CDX2基因的表达量高，鲫鱼的消化吸收率高，相反，CDX2基因的表达量低，鲫鱼的消化吸收率低。