[发明专利]一种polyoxinK高产菌株的构建方法无效
| 申请号： | 201210533704.6 | 申请日： | 2012-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN103114103A | 公开（公告）日： | 2013-05-22 |
| 发明（设计）人： | 陈文青;邓子新;秦娜娜;周佳海 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N15/76 | 分类号： | C12N15/76;C12N1/21;C12R1/465 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 汪俊锋 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种polyoxinK高产菌株的构建方法。通过构建polB中断载体，通过接合转移的方式转到工业菌株中，从而构建工业菌株的polB突变株CXR1。通过生物学测定发现突变株的发酵液与野生型相比，生物活性明显提高。同时又进行了进一步的液相和质谱的分析发现CXR1突变株所产的主要化合物为PolyoxinK组分。该发明对于在工业菌株之中实现组分改造提高多氧霉素的相对生物效价具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 polyoxink 高产 菌株 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种polyoxinK高产菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1）工业菌株的polB突变株CXR1的构建及筛选将polB的中断载体pJTU4720,通过转化导入ET12567/Puz8002的感受态中；挑取单菌落接入指形瓶中8‑10h后按照1：10的比例转接到LB内37℃摇3小时；进行通过接合转移的方式转到金产色链霉菌工业菌株中，接合子经过抗性验证及PCR复证正确后，经放松培养，梯度稀释，在阿泊拉霉素和硫链丝菌素平板上验证，证明挑取的候选突变株为预期的polB中断突变株；2）突变株的发酵调节发酵液pH值至3.0，将突变株直接进行发酵。
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