[发明专利]适用于PCR的棉花基因组DNA快速、批量制备方法

摘要

本发明公开了一种适用于PCR的棉花基因组DNA快速、批量制备方法，涉及作物育种领域转基因作物的分子检测。该方法是由取棉花植株顶部的幼嫩叶片装入离心管中，加入提取液和钢珠，对样品进行破碎处理，然后水浴，加抽提液抽提，用异丙醇沉淀DNA，再用乙醇洗涤，沉淀溶于水即为提取的DNA。本发明解决了棉花基因组DNA提取步骤复杂、耗时耗力的问题，提供了一种能够快速、批量的提取满足PCR检测需求的DNA的方法，能够应用于转基因棉花育种和安全性申报等环节中的分子生物学检测。

主权项

一种适用于PCR的棉花基因组DNA快速、批量制备方法，其特征在于按下列步骤进行：a、取健康的棉花叶片0.05‑0.15g放入2mL离心管内，加入600μL的提取液为NaCl、三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠、聚乙烯聚吡咯烷酮、β‑巯基乙醇和RNase A的混合物，并加入两粒钢珠；b、将步骤a装有样品的离心管放入细胞破碎仪内，于30HZ的频率破碎5min处理，将处理后的离心管放入温度65℃水浴锅中水浴10min；c、取出离心管，在室温下加入700μL氯仿:异戊醇的抽提液抽提一次，7000rpm离心6min，d、吸上清于新的离心管中，加等体积的异丙醇混匀，室温放置10min，12000rpm离心6min，弃上清，得到DNA粗提沉淀；e、将所得DNA粗提沉淀用1mL体积浓度为75%的乙醇洗涤，12000rpm离心3min，弃上清液，得到DNA沉淀，再加60μL灭菌双蒸水，温度‑20℃保存即可。