[发明专利]一种蚓激酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种蚓激酶的制备方法，步骤为：冷冻蚯蚓解冻，加乙醇水溶液，闪式提取；分离得沉淀1和上清液1；向沉淀1中加去离子水，闪式提取，分离，得上清液2；向上清液2中，加入聚丙烯酸钠水溶液，搅拌，分离，得上清液3；向上清液3中加硫酸铵，分离，得上清液4；向上清液4中补加硫酸铵，离心分离得沉淀2；向沉淀2中加入去离子水溶解，用新型重金属离子去除剂TMTH-15调节pH，离心得上清液5；将上清液5进行超滤浓缩，得浓缩液；调pH；干燥，得到蚓激酶。本发明的方法工艺简单，产率高，有效成分含量高，质量易控。原料来源广，前处理简单，成本低廉。废水，废液的无害化回收处理，不污染环境，产品重金属离子含量低。

主权项

一种蚓激酶的制备方法，其特征是包括如下步骤：（1）冷冻蚯蚓解冻，加入所述蚯蚓质量3‑5倍的体积浓度为50%‑95%的乙醇水溶液，调节pH＝5.5‑6.5，闪式提取2min‑5min；（2）采用离心机对步骤（1）获得的提取液进行分离得到沉淀1和上清液1；（3）向步骤（2）分离得到的沉淀1中加入所述沉淀1质量3‑5倍的去离子水，调节pH＝7.0‑7.5，闪式提取2min‑5min，离心分离，得到上清液2；（4）向上清液2中，加入所述上清液2质量15%‑25%的质量浓度为0.1%‑0.5%的聚丙烯酸钠水溶液，调节pH＝6.5‑7.5，搅拌15‑30min，离心分离，得到上清液3；(5)向上清液3中加硫酸铵，使硫酸铵在上清液3中的质量浓度为17%‑23%，调节pH＝6.5‑7.5，离心分离，得到上清液4；（6）向上清液4中补加硫酸铵，使硫酸铵在上清液4中的质量浓度为50%‑70%，调节pH＝5.5‑6.5；离心分离得到沉淀2；（7）向沉淀2中加入所述质量2‑4倍的去离子水溶解，用新型重金属离子去除剂TMTH‑15调节pH＝8.5‑9.5，离心得到上清液5；（8）将上清液5进行超滤浓缩，以除去上清液5中的硫酸铵，得到超滤浓缩液；（9）调节超滤浓缩液pH＝7‑7.5；冷冻干燥，得到蚓激酶。