[发明专利]一种大鼠肾小管上皮细胞缺血后处理的细胞模型的建立方法

摘要

本发明公开了一种对大鼠肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤有保护作用的缺血后处理细胞模型，能最大限度的模拟动物体内缺血后处理。利用该缺血后处理细胞模型减轻大鼠肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的方法，以及经该缺血后处理细胞模型在大鼠肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤保护中的应用均为世界首创。该模型可有效方便地对大鼠肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤进行保护以及对细胞水平的缺血后处理保护机制进行探讨研究。

主权项

一种大鼠肾小管上皮细胞缺血后处理的细胞模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）接种于35mm规格的培养皿的NRK‑52E细胞同步化24h后，将培养皿中的液体更换为缺血缓冲液并置于含0.5% O2和5% CO2的三气培养箱中，于饱和湿度、37℃培养3小时，模拟缺血过程；（2）向培养皿中添加0.5ml新鲜的完全培养液，置于含空气氧浓度、5% CO2二氧化碳培养箱中，于饱和湿度、37℃培养10min，模拟再灌注过程；再将培养皿置于前述的三气培养箱中培养10min，模拟缺氧过程；此20min为一个循环，记为HP1组，完成两个循环记为HP2组，完成三个循环记为HP3组；（3）最后培养皿中的液体更换为完全培养液2mL在前述的二氧化碳培养箱中培养至指定的时间点，以完成整个缺血后处理的细胞模型。