[发明专利]一种无抗生素筛选标记在麻疯树基因转化中的应用方法

摘要

本发明公开了一种无抗生素筛选标记在麻疯树基因转化中的应用方法，该方法构建了甘露糖无抗生素筛选标记载体，通过农杆菌介导将磷酸甘露糖异构酶（PMI基因）和报告基因（GUS基因）转入麻疯树细胞中，利用甘露糖替代抗生素作为选择剂，对转化后的受体细胞进行筛选，并且通过PCR方法对转基因植株进行检测，说明被转化基因在细胞中得到了表达。采用本发明提供的技术方案，对麻疯树叶盘的转化能成功地获得了抗性不定芽，甘露糖无抗生素标筛选的遗传转化率达到10%以上，是抗生素标记的2倍，转化效率高，检测方便，提高了转基因植物的生物安全性，能有效消除抗生素对环境潜在的不利影响。

主权项

一种无抗生素筛选标记在麻疯树基因转化中的应用方法，其特征在于，依次包括以下步骤：1)克隆6磷酸‑甘露糖异构酶基因，构建甘露糖筛选标记的植物表达载体，并将载体导入农杆菌中；2）将经过预培养的麻疯树的叶盘外植体与农杆菌在感染培养基中感染转化，然后在共培养培养基中共培养，再依次转入筛选培养基、芽伸长培养基和生根培养基中进行培养，获得转基因植株。