[发明专利]一种防治鸭甲型病毒性肝炎变异株的卵黄抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种防治鸭病毒性甲型肝炎变异株的卵黄抗体的制备方法，先制备鸭甲型病毒性肝炎变异株的高免鸡蛋，然后利用步骤1制备的鸭甲型病毒性肝炎变异株的高免鸡蛋制备卵黄抗体，本发明制备的鸭甲型病毒性肝炎变异株卵黄抗体能针对鸭甲型病毒性肝炎变异株进行有效的防治，解决现有疫苗及血清抗体、卵黄抗体对变异株治疗无效的困境；同时本发明采用聚乙二醇(PEG)法提取鸭甲型病毒性肝炎变异株卵黄抗体，该法安全、价格低廉，适于大规模生产，且制备的卵黄抗体纯度高、效价高、性质稳定、易于保存。

主权项

一种防治鸭病毒性甲型肝炎变异株的卵黄抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1、制备鸭甲型病毒性肝炎变异株的高免鸡蛋（1）选择健康高产蛋鸡隔离饲养，加强饲料营养，同时加喂专用抗生素制剂以预防细菌感染；（2）制备变异株灭活苗A.制水相用冷冻保存的鸭甲型病毒性肝炎变异株毒种稀释后接种12日龄SPF鸭胚，24‑72h后无菌采集死亡鸭胚尿囊液，然后对其进行灭活程序，取灭活后的尿囊液与无菌吐温‑80进行混合后制成水相；B.制油相取白油、司本和硬脂酸铝，并将三种混合，搅拌均匀后，高压灭菌后制成油相；C.制备油乳剂灭活苗将上述步骤1‑（2）‑A所制得的水相和步骤1‑（2）‑B所制得的油相进行混匀即得；（3）免疫产蛋鸡，制备高免鸡蛋将步骤1‑（2）所制备的变异株灭活苗免疫步骤1‑（1）处理过的高产蛋鸡，进行免疫程序后收集鸡蛋，即为鸭甲型病毒性肝炎变异株的高免鸡蛋；2、利用步骤1制备的鸭甲型病毒性肝炎变异株的高免鸡蛋制备卵黄抗体（1）分离高免鸡蛋蛋黄将步骤1制备的高免鸡蛋进行消毒程序，然后送入蛋清蛋黄分离机进行蛋黄分离；（2）提取卵黄抗体将步骤2‑（1）所分离的蛋黄用TBS作为缓冲液，将卵黄液稀释4倍后，加入35%的聚乙二醇6000，沉淀脂类，卵黄囊抗体保留在上清液中；再将40%甲醛溶液与该上清液混合，使甲醛的终浓度达到0.1%（V/V），对其进行过滤操作后，取滤液4℃保存备用；（3）配制、保存将步骤2‑（2）所得滤液进行鸭甲型病毒性肝炎变异株抗体效价测定，用0.01M、pH7.2的无菌PBS稀释至中和抗体效价为1:512；然后加入终浓度为0.01%（V/V）的吐温80作为稳定剂，搅拌均匀后进行无菌定量分装。