[发明专利]一种诱导树突状细胞与肿瘤细胞融合的方法

摘要

本发明公开了一种诱导树突状细胞与肿瘤细胞融合的方法，其在融合过程中依次添加一定量的聚乙二醇和胶原蛋白来高效诱导细胞融合，其中聚乙二醇能使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。胶原蛋白可以使融合后细胞膜紧缩，修复细胞膜，从而形成稳定、高效的融合细胞，适用于生产肿瘤疫苗、单克隆抗体等特定的生物制品。

主权项

一种诱导树突状细胞与肿瘤细胞融合的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、收集肿瘤细胞于离心管A，收集树突状细胞于离心管B，室温下分别以1500rpm离心10分钟，使用磷酸缓冲液分别重悬离心管A、B中的细胞并计数；S2、按肿瘤细胞:树突状细胞=1:2‑5的数量比将离心管A、B中的两种细胞加入到离心管C中，细胞总数控制在1×107‑5×107个，涡旋混匀，室温下1500rpm离心10分钟，弃去上清，将离心管C置于40°C水浴3‑5分钟；S3、将分子量为1500‑6000的聚乙二醇置于40°C水浴2分钟，将200‑1000μl聚乙二醇在1分钟内加入离心管C中，并将细胞搅匀，将离心管C置于40°C水浴3‑5分钟；S4、先在1分钟内向离心管C中加入1ml磷酸缓冲液以终止反应，再在3‑5分钟内向离心管C中加入30‑40ml磷酸缓冲液混匀；将离心管C在室温下1500rpm离心10分钟，弃去上清，向离心管C中加入30‑40ml磷酸缓冲液混匀；将离心管C在室温下1500rpm离心10分钟，弃去上清，向离心管C中加入200μl‑800μl磷酸缓冲液重悬细胞；S5、向离心管C中加入2‑8μl胶原蛋白，37°C水浴30‑50分钟；S6、向离心管C中加入30ml磷酸缓冲液混匀，将离心管C在室温下1500rpm离心10分钟，弃去上清，向离心管C中加入完全1640培养基重悬细胞，获得融合后的细胞。