[发明专利]寡雄腐霉发酵液制备方法

摘要

本发明涉及一种寡雄腐霉发酵液制备方法及其使用该发酵液有效控制烟草黑胫病的方法，利用“多利维生．寡雄腐霉”卵孢子制剂（菌株：PythiumoligandrumDV74）获得寡雄腐霉菌种，再经液体发酵和过滤浓缩等步骤得到。与寡雄腐霉卵孢子制剂相比，利用寡雄腐霉发酵液防治烟草黑胫病效果好而稳定，受环境条件影响小，施用方法简单，实用性强；成本低廉，施用成本仅为寡雄腐霉孢子制剂的20%；寡雄腐霉发酵设备简单、通用，资源消耗少，工业化生产要求低，一般微生物发酵工厂即可满足生产。

主权项

一种寡雄腐霉发酵液制备方法，其特征在于通过以下步骤实现：（1）寡雄腐霉菌种的获得将“多利维生．寡雄腐霉”卵孢子制剂用无菌水稀释103~105倍，改进马丁氏（Martin）琼脂培养基100°C 溶化摇匀，取5 mL培养基于25 mL试管中，121°C 蒸汽灭菌30分钟，冷却至45°C，每支试管加入16.5 mL 1%孟加拉红无菌水溶液和15 mL 1%链霉素无菌水液，摇匀，倾斜放置制备斜面；接入稀释后的寡雄腐霉卵孢子，25°C暗培养10~12天，挑选出寡雄腐霉菌丝，并用上述培养基和培养方法扩繁菌丝；改进马丁氏（Martin）琼脂培养基：1 g KH2PO4、0.5 g MgSO4·7H2O、5 g 蛋白胨、10 g葡萄糖、5 g 酒石酸铵、1 g 琥珀酸、20 g琼脂 、1000ml水、pH5.5‑6.0；（2）寡雄腐霉发酵液的制备（2.1）培养基：种子罐培养基：2%玉米粉，1%葡萄糖，0.25%酒石酸铵，0.1%琥珀酸，余量为水，初始pH5.5‑6.0；二级罐培养基：同种子罐培养基；发酵罐培养基：2%玉米粉，1.5%葡萄糖，0.5%酒石酸铵，0.2%琥珀酸，余量为水，初始pH5.5‑6.0；（2.2）液体发酵：种子罐盛有121℃灭菌30min并冷却至30~35℃的种子罐培养基，在无菌操作下，将寡雄腐霉菌丝接入种子罐，在通风量为1:0.1，罐压0.05Mpa，30℃±1℃的条件下培养48小时；二级罐盛有121℃灭菌30min并冷却至30~35℃的二级罐培养基，将种子罐中的培养液转入二级罐中，在通风量为1:0.25，罐压0.05Mpa，30℃±1℃的条件下培养24小时；发酵罐盛有121℃灭菌30min并冷却至30~35℃的发酵罐培养基，将二级罐中的培养液转入到发酵罐中，在通风量为1:0.5，罐压0.05Mpa，30℃±1℃的条件下培养120~140小时；（2.3）过滤浓缩：发酵液放入缓存罐，用板框压滤机压滤；滤液打入另一个缓存罐，真空刮板浓缩5倍，蒸发温度40~42℃，即得发酵液。