[发明专利]复杂天然产物中活性成分筛选方法及应用

摘要

本发明提供一种复杂天然产物中活性成分快速筛选方法，采用多通道高效液相色谱作为分离单元、质谱作为联用的检测分析单元、各型号孔板自动馏分收集仪作为收集单元与药效活性评价单元，构成一体化的天然产物分离分析与活性快速筛选系统，可一次得到多块孔板，可进一步进行基于细胞、酶或者化学反应的活性评价，活性筛选数据又可以与分析检测数据进行比对分析得到活性化合物信息，实现了分离制备、分析检测与活性筛选的连贯结合。本发明具有快速分离、自动收集和与药效筛选紧密结合等显著优点，具有速度快、成本低、信息量丰富、样品要求低等优势。可用于复杂天然产物中活性成分的筛选。

主权项

一种复杂天然产物中活性成分筛选方法，其特征在于，通过以下步骤实现： （1）样品并行制备将待测样品配制成溶液，分别取10‑50μL溶液，通过自动进样器或手动进样器注入并行制备系统，所述的并行制备系统由二元液相色谱泵，5根并行连接的色谱柱以及4台馏分收集仪组成，将其中4根色谱柱的洗脱液，采用4台自动馏分收集仪分别收集至4块微孔板，每孔中馏分体积根据微孔板容积确定；（2）样品分析　　将上述并行制备系统中剩余1根色谱柱的洗脱液通过管线与紫外/可见光检测器相连，然后再接入电喷雾－质谱仪，对步骤(1)制备的样品进行定性分析；（3）样品处理　　通过离心浓缩方法，挥干4块收集有相同馏分的微孔板中的溶液，再加入溶剂溶解后，作为活性评价的待测样品；（4）活性评价　　在微孔板上，采用基于细胞、酶或者化学反应的活性评价方法对微孔板中各孔对应的馏分的活性进行评价，筛选其中具有显著活性的馏分； （5）活性成分筛选综合处理液相色谱－质谱联用分析数据和活性评价数据，确定活性馏分在液相色谱－质谱联用分析图谱中的位置，并进一步提取与该馏分相对应的化合物的紫外光谱、分子量、分子碎片等化学信息，推断活性化合物结构，筛选出活性成分。