[发明专利]H5N1亚型禽流感病毒反转录环介导的体外等温扩增检测方法和试剂盒

摘要

本发明公开了H5N1亚型禽流感病毒的反转录环介导的体外等温扩增检测技术（RT-LAMP）检测方法和试剂盒，通过对H5N1亚型禽流感病毒HA基因序列的分析，选出高度保守且特异的核苷酸区域，设计了三对特异性引物，其中所用的外引物分别含有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的序列；内引物分别含有Seq ID No.3和Seq ID No.4及Seq ID No.5和Seq ID No.6所示的序列；环引物分别含有Seq ID No.7和Seq ID No.8所示的序列。本发明的方法和试剂盒能够特异性地检测出鼻咽拭子、细胞培养液、组织悬液等多种样品中的H5N1亚型禽流感病毒；灵敏度高，操作方便快捷。本发明所述的H5N1亚型禽流感病毒RT-LAMP检测试剂包含三对特异性引物。

主权项

H5N1亚型禽流感病毒的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括一对外引物、一对内引物及一对环引物，所述一对外引物为分别具有Seq ID No.1所示序列的前外引物F3和具有Seq ID No.2所示序列的后外引物B3，所述一对内引物包括前内引物FIP和后内引物BIP，所述前内引物FIP含有Seq ID No.3和Seq ID No.4所示的序列，Seq ID No.3和Seq ID No.4之间通过0～4个碱基相连；所述后内引物BIP含有Seq ID No.5和Seq ID No.6所示的序列，Seq ID No.5和Seq ID No.6之间通过0～4个碱基相连,所述一对环引物为分别具有Seq ID No.7所示序列的环引物FLOOP和具有Seq ID No.8所示序列的环引物BLOOP，Seq ID No.1：5’‑‑‑TGGKTGTTTYGARTTCTAYCACAA‑‑‑3’Seq ID No.2：5’‑‑‑AGAAACAAGGGTGTTTTTAAYTAYAATCTG‑‑‑3’Seq ID No.3：5’‑‑‑TATTTCCTCYCTGTTTAGYCTTGMTTCT‑‑‑3’Seq ID No.4：5’‑‑‑GTGACAATGAATGYATGGAAAGTGT‑‑‑3’Seq ID No.5：5’‑‑‑GTGGCGAGTTCCCTAGCACTGG‑‑‑3’Seq ID No.6：5’‑‑‑CTCACAAWTYTAGATGCAAATTCTGC‑‑‑3’Seq ID No.7：5’‑‑‑TCTGARTAYTGYGGATAGTCATACGTTCC‑‑‑3’Seq ID No.8：5’‑‑‑GGTAGCTGGTCTRTCTTTTTGGATGTG‑‑‑3’。