[发明专利]一种卡特兰组织培养的方法

摘要

本发明涉及一种卡特兰组织培养繁殖的方法，属于植物细胞工程技术领域。以卡特兰新梢为材料，通过愈伤组织诱导、继代培养和生根培养，进行卡特兰组培苗的快速扩繁。本发明提高了培养基数，有效解决了卡特兰茎尖常规培养方法的外植体褐变现象，扩大了增殖系数，具有最高的诱导成活率；培养基配方在MS和KC基本培养基的基础上改良，易配制，成本低。本发明是现有技术的有益改进，可为卡特兰产业化开发应用提供技术支撑。

主权项

卡特兰的组织培养方法，其特征在于，（1） 外植体的选择与灭菌选6~8厘米长的新梢作材料，用升汞消毒法进行消毒，切取顶芽和侧芽生长点中心部位的分生组织块作外植体进行培养；（2）愈伤组织诱导培养将外植体分生组织块放置在诱导培养基中，卡特兰茎尖增殖的诱导培养基为：改良的MS + 6‑BA3～10mg/L + NAA0.5～3mg/L + 糖20000～30000mg/L，培养条件为液体震荡暗培养，温度20～25℃，液体培养皿放置在回旋器上，回旋频率120rpm，培养40‑60天；其中，改良的MS基本培养基为，单位：mg/L：NH4NO3：850～1850、KNO3：1000～1900、CaCl2·2H2O：250～650、MgSO4·7H2O：200～400、KH2PO4：50～200、KI：0.4～0.9、H3BO3：3.0～7.0、MnSO4·4H2O：12.0～25.0、ZnSO4·7H2O：2.5～9.5、Na2MoO4·2H2O：0.16～0.35、CuSO4·5H2O：0.016～0.025、CoCl2·6H2O：0.016～0.025、FeSO4·7H2O：20.0～30.0、Na2·EDTA·2H2O：18.0～40.0、肌醇：50~100、氨基乙酸：2.0~3.0、谷氨酸：10~18、天冬酰胺酸：10~18；（3）继代培养把增殖的愈伤组织转接到继代培养基，培养基配方为：改良的KC + 琼脂6000～8000mg/L + 糖20000～30000mg/L，培养条件为：温度20～28℃，光强1500～3000Lx，每天光照 12~16小时，每30天转接1次，愈伤组织上逐渐分化出原球茎，原球茎进一步发育成幼苗；其中，改良的KC基本培养基为，单位：mg/L：Ca(NO3)2·4H2O：500~1000、KH2PO4：200~400、MgSO4·7H2O：100～300、(NH4)2SO4：400～1000、NH4NO3：350～850、FeSO4·7H2O：10～50、KCl：200~400、MnSO4·4H2O：3.0～10.0；（4) 生根培养将3～4cm高的苗接入生根培养基中，培养基配方为：改良的KC + NAA0.2~2mg/L + 琼脂6000～8000mg/L + 糖20000～30000mg/L，培养条件为：光照培养，温度为20～28℃，光强1500～3000Lx，每天光照16小时。