[发明专利]一种砂梨多倍体的诱导方法

摘要

本发明是一种砂梨多倍体的诱导方法。将砂梨（Pyrus pyrifolia）组培苗的单芽茎段用秋水仙素进行多倍体的诱变，诱变后进行分化培养及生根培养，并进行多倍体鉴定。本发明的方法具有诱导定向性好、成本低、操作简单的特点，为砂梨多倍体育种提供一种可行高效的新方法，对推进我国砂梨人工诱导多倍体技术具有重要的应用价值。

主权项

一种砂梨多倍体的诱导方法，其特征在于通过如下步骤实现：（1）在超净工作台上，将砂梨无菌试管苗剪去顶端，促进腋芽萌发，4‑6d后将试管苗剪成带叶的单芽茎段；（2）在遮光的情况下，将单芽茎段浸渍在经高压灭菌的0.05%～0.2%秋水仙素溶液中，然后在摇床上以120～140r/min震荡，处理40～50h，处理完毕后无菌水冲洗3次；（3）将浸渍处理后的单芽茎段转接到含有0.002%～0.003%秋水仙素的增殖培养基中，单芽茎段的腋芽要埋入增殖培养基中，使生长点与药液充分接触，叶片露出培养基，暗培养6‑10d后转到光下培养，待处理的腋芽萌动抽茎长至1～2cm后继代到新鲜的培养基中；所述的增殖培养基：1/2MS+6‑BA 2.00～1.50mg/L+IBA 0.2～0.4mg/L+GA3 1.0～3.0mg/L+蔗糖25～35g/L+琼脂5～7g/L，PH5.8；培养条件：培养室温度25±1℃，光周期：15～20h光照/6～10h黑暗，相对湿度40％～80％；（4）在新鲜培养基上继代培养3～4次后，从中选择形态变异明显的植株进行鉴定，然后对鉴定为多倍体的植株进行扩繁；继代培养基：1/2MS+6‑BA 2.00～1.50mg/L+IBA 0.2～0.4mg/L+GA3 1.0～3.0mg/L+蔗糖25～35g/L+琼脂5～7g/L，PH5.8；培养条件：培养室温度25±1℃，光周期为15～20h h光照/6～10h黑暗，相对湿度40％～80％。