[发明专利]滇池金线鲃精子超低温冷冻保存及复苏方法

摘要

滇池金线鲃精子超低温冷冻保存及复苏方法，属于低温生物学技术领域。方法为：选择性成熟的优质原种或良种，用100 ppm的MS-222麻醉5 min，挤压擦干的腹部，成熟精液流入1.5 mL离心管，检测鲜精活力，活力在85%以上的精液用于冷冻。将精液与抗冻液（D-15+7.5%乙二醇）按体积比1：2的比例稀释，分装，4℃平衡60 min，在液氮面上方6 cm处平衡2 min，液氮面上平衡2 min后投入液氮中保存。精子复苏方法是在37℃水浴快速晃动20 s解冻，将挤出的滇池金线鲃鱼卵与解冻后的精液按1：105的数量比混合使卵受精。本发明具有成本低，操作简便，保存时间长，复苏后精子的活力较高，人工繁殖的滇池金线鲃鱼的受精率和孵化率较高，能投入规模生产的优点；对于开展鱼类资源恢复与重建也具有重要意义。

主权项

一种滇池金线鲃精子超低温冷冻保存及复苏方法，其特征在于该保存及复苏方法的具体步骤如下：a.配子的采集：采精方法为轻压腹部法，选择形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的亲鱼原种或良种，用100ppm的MS‑222麻醉5min，鱼类腹部用毛巾擦干，然后轻轻挤压腹部，成熟的精液自然流出到1.5mL离心管中；b.鲜精活力检测：先用移液器滴一滴水于载玻片上，对准视野，然后用针尖挑取上述精液立即于显微镜下搅拌，观察其活力，鲜精活力在85%以上的精液样品用于精子冷冻；c.冷冻方法：将精液与抗冻液按1:2的体积比稀释后分装，经4℃平衡60min，然后在液氮面上方6cm处平衡2min，液氮面上平衡2min后投入液氮中保存；其中：抗冻液为稀释液D‑15+7.5%乙二醇；d.复苏方法是将冻存管从液氮中取出后置于37℃水浴锅中快速晃动20s。