[发明专利]一种Cre融合蛋白功能检测细胞及修饰后的Cre融合蛋白无效
| 申请号： | 201210271661.9 | 申请日： | 2012-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN102827873A | 公开（公告）日： | 2012-12-19 |
| 发明（设计）人： | 余源;张涌;王勇胜;刘军;权富生;田进海;王易之;李仲夏 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学;杨凌科元克隆股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/48;C12Q1/02;C12N9/12;C12N15/70 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 陆万寿 |
| 地址： | 712100 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种Cre融合蛋白功能检测细胞及修饰后的Cre融合蛋白。Cre融合蛋白功能检测细胞，宿主细胞为HEK293细胞，将pAcmv-stop-EGFP载体和phiC31整合酶共转染宿主细胞。通过phiC31整合酶的作用，使得携带检测Cre重组酶功能的LoxP元件的载体以单拷贝的形式整合到HEK293细胞系的假attP位点，为研究Cre融合蛋白穿膜效率和生物活性提供稳定可靠的细胞模型。经TAT和NLS多肽修饰的Cre融合蛋白HNTC，其穿膜效率高、生物活性好，可有效地作为哺乳动物细胞染色体水平上基因操作的工具。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 cre 融合 蛋白 功能 检测 细胞 修饰 | ||
【主权项】：
一种Cre融合蛋白功能检测载体，其特征在于，包括Pcmv IE启动子，在Pcmv IE启动子的上游设有attB序列，Pcmv IE启动子的下游设有两个同向的Loxp序列，两个同向的Loxp序列之间依次设有BGH终止子、BGH终止子和SV40A终止子，Loxp序列的下游设有荧光标记基因及抗生素筛选基因；当Loxp序列及其之间的三个终止子在Cre重组酶作用下剪切后，Pcmv IE启动子和荧光标记基因拼接，启动荧光标记基因的表达。
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