[发明专利]一种生产木糖异构酶的方法无效
申请号: | 201210251839.3 | 申请日: | 2012-07-09 |
公开(公告)号: | CN102747063A | 公开(公告)日: | 2012-10-24 |
发明(设计)人: | 张爱联;尹慧祥;易国辉 | 申请(专利权)人: | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
主分类号: | C12N9/90 | 分类号: | C12N9/90;C12N15/81;C12N15/75;C12R1/465;C12R1/19;C12R1/01;C12R1/84;C12R1/865;C12R1/125 |
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地址: | 571101 海南省海口市学院*** | 国省代码: | 海南;66 |
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摘要: | 本发明公开了一种生产木糖异构酶的方法。属生物技术领域。首先克隆栖热菌、链霉菌和大肠杆菌的木糖异构酶基因;构建含以上三种木糖异构酶基因表达框架的毕赤酵母表达载体、酿酒酵母表达载体和枯草芽孢杆菌表达载体,并将载体分别转化相对应的宿主菌;分别筛选高表达木糖异构酶的重组子作为工程菌;发酵毕赤酵母工程菌、酿酒酵母工程菌和枯草芽孢杆菌工程菌生产重组混合木糖异构酶。与传统的由单基因编码的木糖异构酶不同,本发明生产的重组混合木糖异构酶的适合反应的温度和pH范围广,适合于多种用途;并且,含多基因表达框架的工程菌表达的木糖异构酶的产量明显高于含单基因的工程菌表达的木糖异构酶的产量,起到降低生产成本作用。 | ||
搜索关键词: | 一种 生产 木糖异构酶 方法 | ||
【主权项】:
一种生产木糖异构酶方法,其特征在于,其具体步骤如下:1)、应用分子生物学技术克隆栖热菌的木糖异构酶基因、链霉菌的木糖异构酶基因和大肠杆菌的木糖异构酶基因;2)、构建分别含上述基因的表达框架的毕赤酵母表达载体、酿酒酵母表达载体和枯草芽孢杆菌表达载体;3)、将上述构建的毕赤酵母表达载体转化毕赤酵母获得毕赤酵母重组子,将上述构建的酿酒酵母表达载体转化酿酒酵母获得酿酒酵母重组子,将上述构建的枯草芽孢杆菌表达载体转化枯草芽孢杆菌获得枯草芽孢杆菌重组子;4)、筛选高表达以上所述的三种木糖异构酶的毕赤酵母重组子作为含栖热菌的木糖异构酶基因、链霉菌的木糖异构酶基因表达框架和大肠杆菌的木糖异构酶基因表达框架的毕赤酵母工程菌,筛选高表达以上所述的三种木糖异构酶的酿酒酵母重组子作为含栖热菌的木糖异构酶基因、链霉菌的木糖异构酶基因表达框架和大肠杆菌的木糖异构酶基因表达框架的酿酒酵母工程菌,筛选高表达以上所述的三种木糖异构酶的枯草芽孢杆菌重组子作为含栖热菌的木糖异构酶基因、链霉菌的木糖异构酶基因表达框架和大肠杆菌的木糖异构酶基因表达框架的枯草芽孢杆菌工程菌;5)、分别发酵以上所述的毕赤酵母工程菌、酿酒酵母工程菌和枯草芽孢杆菌工程菌生产木糖异构酶。
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