[发明专利]可控性精氨酸偶联壳聚糖的制备方法

摘要

本发明公开了一种可控性精氨酸偶联壳聚糖的制备方法,包括如下步骤：(1)精氨酸酯化；（2）对精氨酸酯进行氨基保护得到氨基保护精氨酸酯；（3）脱酯反应；（4）氨基保护的精氨酸修饰壳聚糖：将壳聚糖溶于醋酸水溶液中，加入氨基保护的精氨酸与偶联剂，室温搅拌，超滤或透析，冷冻干燥，得到氨基保护的精氨酸修饰的壳聚糖；（5）脱氨基保护得到可控制精氨酸偶联壳聚糖。本发明的方法能够控制精氨酸的取代度，并且证明在精氨酸的取代度为21.9-45.5%的范围内时，精氨酸修饰的壳聚糖载体的基因递送能力增强，基因表达效率显著性提高。本发明的方法制备简单。

主权项

一种可控性精氨酸偶联壳聚糖的制备方法,其特征是包括如下步骤：(1)精氨酸酯化：按摩尔比为1：1.5‑5的比例称取精氨酸和酰化试剂，加入到C1‑C11的无水醇中，精氨酸与无水醇的质量比为1:5‑8，在20‑70℃水浴反应1‑20小时，减压蒸干，得到精氨酸酯；（2）对精氨酸酯进行氨基保护得到氨基保护精氨酸酯；（3）脱酯反应：向氨基保护精氨酸酯中加入无机碱，加入体积浓度为70‑95%的甲醇水溶液作为溶剂，35‑80℃反应1‑36小时，加酸中和至pH为6‑7，蒸干溶剂，得到氨基保护的精氨酸；所述无机碱与精氨酸的摩尔比为1.2‑4:1；（4）氨基保护的精氨酸修饰壳聚糖：将壳聚糖溶于醋酸水溶液中，加入氨基保护的精氨酸与偶联剂，室温搅拌10‑14小时，超滤或透析除去过量的氨基保护的精氨酸和偶联剂，冷冻干燥，得到氨基保护的精氨酸修饰的壳聚糖；所述精氨酸、壳聚糖和偶联剂的摩尔比为1：1‑20：2‑4000；所述醋酸水溶液中醋酸的质量含量为1‑5%；（5）脱氨基保护将氨基保护的精氨酸修饰的壳聚糖放入高压釜中，加入钯/碳作催化剂，加入溶剂二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，所述氨基保护的精氨酸修饰的壳聚糖与钯/碳的质量比是40‑60:1，通入氢气保持28‑40个大气压，25‑70℃反应3‑8小时，蒸干溶剂，反应产物溶解在0.1‑1摩尔/升的pH=4.0‑5.5的乙酸钠‑乙酸缓冲溶液中，过滤除去钯/碳，经透析、冷冻干燥得到可控制精氨酸偶联壳聚糖。