[发明专利]一种酪啡肽、抗菌肽、糖巨肽和酪蛋白磷酸肽的联产工艺

摘要

本发明公开了一种酪啡肽、抗菌肽、糖巨肽和酪蛋白磷酸肽的联产工艺，包括以下步骤：1)酪蛋白抗菌肽的制备；2)酪蛋白磷酸肽(CPPs)的制备；3)酪蛋白糖巨肽和酪蛋白酪啡肽的制备。本发明充分利用了酪蛋白酶和胃蛋白酶不同酶解条件，以及水解目的产物分子量不同的特点，分布水解得到抗菌肽、酪蛋白磷酸肽、酪蛋白糖巨肽和酪蛋白酪啡肽。各种功能肽的产率均较高，且各种性质和生物活性具有重现性和稳定性，弥补了已有生产工艺单一的不足。

主权项

一种酪啡肽、抗菌肽、糖巨肽和酪蛋白磷酸肽的联产工艺，其特征在于，包括以下步骤：1)酪蛋白抗菌肽的制备：在97份100mg/mL酪蛋白溶液中加入3份100mg/mL胰蛋白酶溶液，调节酶解液pH为8.5，55℃恒温水解2.5h，之后使用分子量为3000和10000的超滤膜对水解液进行超滤，收集分子量3000‑10000的酶水解液冷冻干燥即得到酪蛋白抗菌肽；2)酪蛋白磷酸肽(CPPs)的制备：取步骤1)中剩余的酶水解液继续水解1h，在4℃条件下，10000r/min离心20min除去未水解的大分子物质和溶液中的杂质，沉淀收集备用，向上清液中加入10％(v/v)CaCl2和无水乙醇，使两者在溶液中的终浓度分别为1％和50％，上清液室温放置过夜，在4℃条件下，10000r/min离心20min，收集沉淀，用无水乙醇经过3次洗涤沉淀，最终沉淀即是酪蛋白磷酸肽(CPPs)；3)酪蛋白糖巨肽和酪蛋白酪啡肽的制备：取步骤1)和步骤2)中剩余的酶水解残留物质，调节pH至1.6使沉淀溶解，配制成为10mg/ml溶液，按照胃蛋白酶与酶解液质量比1∶100在温度55℃、pH值为1.6条件下水解2h，调节水解液pH为4.6，4℃条件下，10000r/min离心20min，取上清液备用，回调pH到7.0，此时水解液中酪蛋白糖巨肽以多倍体存在，其分子量为20000～40000之间，而酪蛋白酪啡肽分子量小于1000，使用分子量为1000的超滤膜对上清液进行超滤分离，酪蛋白糖巨肽位于分子量大于1000的组分中，而酪蛋白酪啡肽位于分子量小于1000的组分中，分别冷冻干燥两种组分。