[发明专利]一种抑制牛肝菌菌丝体褐化的培养方法

摘要

本发明涉及一种抑制牛肝菌菌丝体褐化的培养方法，属于生物技术领域（大型真菌培养）。牛肝菌目前仍难以人工栽培，其子实体完全依赖野外采收。近年由于气候变化、生态破坏等原因其自然产量已严重下降，价格昂贵。牛肝菌菌丝在人工培养基上生长缓慢、菌丝生长一段时间后，培养基及菌丝都容易褐化，影响后续生长。本发明以云南产的一株未开伞的美味牛肝菌子实体为材料，通过菌丝体诱导、菌丝体活化等途径，提供了一种能抑制或降低褐化的培养基，该培养基具有成分清晰、简单，成本低廉，菌丝体生长迅速，菌落白净等特点。这为牛肝菌菌丝体的规模化培养、人工或半人工驯化等奠定了重要基础。

主权项

一种广义美味牛肝菌(Boletus edulis s.l.)菌丝体的培养方法，其特征为，采用未开伞的子实体诱导菌丝，针对菌丝体培养过程中培养基及部分菌丝褐化、颜色加深等现象，进行培养基改良及优化，使菌丝快速生长的同时，保持菌落洁白、干净、清亮，主要包括下列步骤：（1）材料的选择：野外采摘生长优良、无虫害、未开伞、菌柄较粗壮、菌盖较肥厚的成熟子实体；（2）材料的消毒及处理：将子实体带回实验室，于超净台上用酒精棉球，轻擦菌盖表面及菌柄等部位，除去表面泥沙或土，将子实体从菌盖中部一分为二，用解剖刀取菌柄与菌盖交接处的内部组织块，切成约0.3～0.50cm2的小块；（3）菌丝体诱导：将以上切分的小组织块轻轻嵌入试管斜面诱导培养基表面，培养温度为22～23℃，暗培养7‑12天，菌块周围开始萌发出白色菌丝，55‑62天菌丝体基本长满培养基，但30‑35天，随着培养时间的延长培养基颜色逐渐加深，部分白色菌丝也因褐色分泌物的产生而颜色加深；（4）菌丝体活化与均一性培养：将上面诱导出的菌丝体从试管中转接入培养皿(预实验培养基)，经过30‑35天的暗培养（培养温度为22～23℃），培养皿中形成圆形规则菌落，用直径1 cm的圆形打孔器取菌落边缘同一生长期的菌块进行扩大培养，每30‑35天扩大培养一次；（5）培养基改良及优化：以预实验培养基为基本培养基，去除葡萄糖、NH4NO3、KNO3，从碳源、氮源、C/N比例等方面对菌丝体的基本培养基进行了优化，得到了优化的培养基，使用该培养基，菌丝32‑34天基本长满斜面试管，优化的培养基具有成分清晰、简单，成本低廉，菌丝体生长迅速，菌落白净等特点。