[发明专利]花芽内源自由态IAA的提取和定量测定

摘要

花芽内源自由态IAA的提取和定量测定，涉及本发明涉及植物内源IAA的提取与定量测定领域，本发明的技术方案：对花芽进行精处理，使花芽内部的自由态IAA可以与其他杂质很好的分离开来，同时用HPLC技术进行精确的定量测定，以更好的测定花芽中自由态IAA的含量。本发明的优点在于：本发明创制的花芽自由态IAA提取技术及测定条件可以在短时间内就可以针对花芽内部的自由态IAA进行分离和定量测定并大大的提高提取的精度。

主权项

一种花芽内源自由态IAA的提取方法，具体步骤为：1)称取大离心管重量(M1)，取花芽，重量≤0.8g，立即用液氮研磨成精细的粉末(M)移入大离心管底部，迅速称取重量(M2)，待测芽体重量M＝M2‑M1；2)向大离心管中迅速加80％甲醇8ml，封口，迅速在振荡仪上振荡30s，然后置于‑20℃浸泡提取24h；3)第一次提取结束，在8500rpm下进行离心25min；4)取第一次离心后的上清液移入新离心管中，沉淀物再用80％甲醇6ml溶解，充分震荡后在‑20℃浸泡提取12h；5)第二次提取结束，在8500rpm下进行离心25min；6)取第二次离心后的上清液与第一次的上清液合并，沉淀物再用80％甲醇4ml溶解，充分震荡后在‑20℃浸泡提取6h；7)第三次提取结束，在8500rpm下进行离心25min；8)取第三次离心后的上清液与第一、二次的上清液合并，弃掉沉淀物；9)分别用无水乙醇8ml、蒸馏水16ml、80％甲醇10ml加入waters C18(500mg，3ml)固相萃取小柱活化润洗柱体；10)将第8步中合并的上清液加入waters C18固相萃取小柱过滤处理，收集流出液，处理完再加入6ml甲醇(浓度)淋洗柱体，收集并合并流出液；11)将流出液用旋转蒸发仪在45℃低压蒸馏至干，然后用1ml 80％的甲醇溶解，收集置于2ml离心管；12)用0.2μm的微孔滤膜过滤样液，进样；整个步骤要在不影响试验进行的弱光条件下进行。