[发明专利]一种抗肝癌蛋白质pp3501及其制备方法和应用

摘要

本发明属于药物或保健品技术领域，特别是一种抗肝癌蛋白质pp3501及其制备方法和应用。这种蛋白可用基因工程的方法生产制备，将重组原核表达质粒转化大肠杆菌表达菌，在含有选择性抗生素的培养基中，35℃～38℃振荡培养。1～5小时后用终浓度为0.1～3mmol/L的异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷诱导2～6小时。4℃，分别收集细菌和上清；上清液浓缩后通过亲和树脂进行纯化。大肠杆菌中以包涵体形式存在的蛋白，用尿素处理，溶解，通过亲和树脂进行纯化。蛋白质pp3501在制备抗肝癌药物和保健品或作为抗肝癌药物和保健品组份中的应用。这种蛋白能够抑制多种表型肝癌细胞生长，并增强丁酸钠抑制肝癌细胞生长。

主权项

一种抗肝癌蛋白质pp3501的制备方法，是通过基因工程生产抗肝癌蛋白质pp3501，具体按以下步骤：(1)用含多聚腺苷酸序列的引物，35～42℃反转录，然后用上游引物：5’‑GATCCGAATTCACCATGGTTTTAGCAGATGC‑3’，下游引物：5’‑TGTCGACGGGTCTTGCACGTGTCAC‑3’进行聚合酶链反应扩增，聚合酶链反应参数：90℃～95℃预变性5分钟，90℃～95℃加热10～40秒，53℃～60℃反应25～40秒，70℃～75℃反应25～40秒，25～40个循环后72℃延伸3～10分钟，1～2％琼脂糖凝胶电泳鉴定并回收反转录‑聚合酶链反应产物；(2)分别用制性内切酶酶切纯化后的反转录‑聚合酶链反应产物和原核表达载体，再分别纯化后，用连接酶连接构建成真核或原核表达重组质粒，真核表达质粒携带的pp3501可用于基因治疗的成分，原核表达重组质粒转化大肠杆菌，用基因工程技术制备pp3501蛋白；(3)将重组原核表达质粒转化大肠杆菌表达菌，在含有选择性抗生素的培养基中，35℃～38℃振荡培养，1～5小时后用终浓度为0.1～3mmol/L的异丙基‑beta‑D‑硫代半乳糖吡喃糖苷诱导2～6小时，4℃，分别收集细菌和上清；(4)上清液浓缩后通过亲和树脂进行纯化，大肠杆菌中以包涵体形式存在的蛋白，用尿素处理，溶解，通过亲和树脂进行纯化。