[发明专利]神经营养因子基因修饰的干细胞移植治疗脊髓损伤

摘要

本发明专利涉及一种生物医药技术，具体是神经营养因子基因修饰的干细胞移植治疗脊髓损伤，它是按如下步序进行：(1)转基因干细胞构建；(2)脊髓损伤模型制作；(3)斜板实验；(4)开放平面场地实验；(5)工程细胞的标记；(6)细胞移植；(7)组织样本的获取；(8)脊髓损伤面积观察；(9)干细胞在体内的存活观察；(10)干细胞在体内的迁移。本发明移植至成年脊髓损伤大鼠的转基因干细胞不仅存活、迁移，还可减小脊髓损伤面积，促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复。因此，转基因干细胞为运动神经元损伤性疾病如脊髓损伤等提供了一个新的治疗途径。

主权项

神经营养因子基因修饰的干细胞移植治疗脊髓损伤，其特征是，它按如下步序进行：(1)转基因神经干细胞制备，将构建的重组逆转录病毒载体pLNCX2‑GDNF的质粒包装并感染神经干细胞，制备转基因干细胞GDNF‑NSCs。(2)脊髓损伤模型制作，按照Tator脊髓损伤制作法，将大鼠椎管打开夹击并缝合护理，制作脊髓损伤动物模型。(3)斜板实验，术后动物置于一斜板让其静止，记下斜板与水平面夹角度数。(4)开放平面场地实验，手术动物置于一开口圆盆，让动物爬行于其中，观察动物的运动及其协调情况并打分。(5)工程细胞的标记，转基因神经干细胞加入Hochest原液，经孵育、清洗，并于冰中待移植。(6)细胞移植，转基因神经干细胞NSCs‑GDNF移植大鼠损伤的脊髓并缝合肌肉、皮肤和护理。(7)组织样本的获取，过度麻醉动物并作心脏灌注，取出损伤的脊髓经固定行冷冻水平切片，黏贴于经铬矾明胶包被的玻片备用。(8)脊髓损伤面积观察，使用免疫酶染色法，将做好的组织片经GFAP单抗染色显示脊髓损伤空洞面积。(9)转基因神经干细胞在体内的存活观察，用免疫组织荧光染色法，把经细胞核染料标记的脊髓标本行神经干细胞标记分子染色，观察移植细胞的存活。(10)转基因神经干细胞在体内的迁移，细胞核染料标记的干细胞在移植大鼠损伤的脊髓4周后的迁移情况。