[发明专利]一种检测人类Duffy血型基因型的熔链曲线方法和试剂

摘要

本发明涉及一种能够检测人类Duffy血型基因型的熔链曲线方法，以及该方法所涉及的试剂，可以检测人类Duffy血型基因Fy(a)和Fy(b)。它包括下述步骤：引物设计；制备人基因组DNA；常规PCR，初步确认扩增引物的有效性和特异性；单对引物实时荧光定量PCR测定β-actin、Fy(a)以及Fy(b)基因扩增产物的熔链曲线，确定Tm值及峰形；建立实时荧光定量多重PCR反应体系，测定β-actin+Fy(a)，β-actin+Fy(b)混合产物的熔链曲线，通过Tm值及峰形确定Fy(a)，Fy(b)的基因型。本发明所涉及的方法具有成本相对低廉，能实现多重反应，产物分析在计算机上完成而避免了人为偏差、并能最大限度地避免常规PCR产物污染，每一反应孔均设内参照、便于对实验质量的监控等特点，从而实现对红细胞Duffy血型基因型快速、准确的大规模筛查。

主权项

一种检测人类Duffy血型基因型的熔链曲线方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)设计扩增引物，用于扩增内参照基因β‑actin、Duffy血型Fy(a)以及Fy(b)基因；(2)制备人基因组DNA；(3)常规PCR，对扩增引物的有效性和特异性进行初步确认；(4)单对引物实时荧光定量PCR测定β‑actin、Fy(a)以及Fy(b)基因扩增产物的熔链曲线，确定Tm值及峰形，对扩增引物的有效性和特异性进行确认；(5)建立实时荧光定量多重PCR反应体系，测定β‑actin+Fy‑a，β‑actin+Fy‑b混合产物的熔链曲线，对照步骤(4)测得的Tm值及峰形确定反应的有效性及Fy(a)，Fy(b)的基因型。