[发明专利]一种利用蛇足石杉原叶体生产石杉碱甲的方法

摘要

本发明公开了一种利用蛇足石杉原叶体生产石杉碱甲的方法。该方法以离体蛇足杉原叶体为材料，经过人工大量培养以生产石杉碱甲。方法简单易行，为石杉碱甲的来源提供新的途径，同时保护了野生蛇足石杉的资源。

主权项

一种利用蛇足石杉原叶体生产石杉碱甲的方法，其特征在于，按以下步骤进行：(1)原叶体的诱导将蛇足石杉孢子囊在超净工作台中先浸在质量分数为70％的乙醇溶液中30s；接着置于浓度0.1％的HgCl2溶液中浸泡8min，再用无菌水冲洗3次，将孢子囊或者孢子囊破裂后从中散出的孢子作为原叶体诱导的外植体；将得到的外植体接种在常规MS培养基中，在培养温度为22±2℃、光照时间12h/d、光照强度为1000Lx条件下培养12周，从外植体上长出绿色的原叶体组织；(2)原叶体的培养步骤(1)中获得的原叶体组织切割成0.3cm2的小片，然后转入石杉碱甲生产培养基上继续培养，培养条件与步骤(1)中相同，培养7周后，原叶体可用于提取石杉碱甲；所述石杉碱甲生产培养基为：常规的MS培养基中加入三氯化铁1mg/L～10mg/L；(3)原叶体中石杉碱甲的提取步骤(2)中经过7周培养获得的原叶体在60℃烘干，采用2％酒石酸浸提24h，然后离心，得到上清液，即为石杉碱甲提取液；浓缩石杉碱甲提取液，获得石杉碱甲的粗品。