[发明专利]一种丙酮酸磷酸双激酶重组表达菌株的构建方法及其应用无效
| 申请号： | 201210014850.8 | 申请日： | 2012-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN102653727A | 公开（公告）日： | 2012-09-05 |
| 发明（设计）人： | 王周平;夏雨;弓紫丰 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/54;C12N15/70;C12N9/12;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种丙酮酸磷酸双激酶重组表达菌株的构建方法，还涉及所构建菌株的具体应用，即对丙酮酸磷酸双激酶的表达、纯化方法，以及所得到丙酮酸磷酸双激酶在ATP-荧光素-荧光素酶发光反应体系中的应用。本发明克隆到来自于天蓝色链霉菌的丙酮酸磷酸双激酶编码基因ppdk，并将其构建为表达载体pET28a-ppdk，该载体转化到表达宿主BL21(DE3)后得到重组表达菌株BL21(DE3)/pET28a-ppdk，对该菌株进行培养和诱导，表达了丙酮酸磷酸双激酶，采用亲和层析方法纯化了丙酮酸磷酸双激酶。该纯化的酶在ATP-荧光素-荧光素酶发光反应体系中能有效催化反应产物单磷酸腺苷(AMP)和焦磷酸(PPi)生成三磷酸腺苷(ATP)，因而在ATP发光检测中具有重要用途。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 丙酮酸 磷酸 激酶 重组 表达 菌株 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种表达生产丙酮酸磷酸双激酶的重组大肠杆菌(Escherichia coli)菌株BL21(DE3)/pET28a‑ppdk的构建方法及其应用。该菌株已于2012年1月4日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京)保藏，其保藏编号为CGMCC 5691。
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