[发明专利]川丹参的组织培养快繁方法

摘要

本发明采用的以嫩茎段为外植体的川丹参的组织培养快繁方法，步骤如下：选择外植体；消毒处理；诱导培养；增殖培养；生根培养；炼苗与移栽。本发明川丹参的组织培养快繁方法，成果地将组织培养技术用于川丹参的快繁，并采用芽诱导和芽继代增殖结合的培养方法，有效克服了丹参茎段组织的褐化，使褐化降低20％。本发明川丹参的组织培养快繁方法，具有芽诱导率高和移栽成活率高的优点，芽诱导率一般可以达到85％以上，移栽成活率一般可到达80％以上。

主权项

本发明采用的以嫩茎段为外植体的川丹参的组织培养快繁方法，步骤如下：(1)、选择外植体：选取川丹参1号带顶芽和带节的嫩茎段2～4cm为外植体；(2)、消毒处理：将步骤1的嫩茎段经自来水冲洗、洗衣粉液清洗后，流水冲洗30min，超净工作台上用无菌水冲洗1～3次，75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗2～4次，再用0.1％HgCl2并滴加3‑5滴吐温‑80消毒5‑7min，然后用无菌水冲洗5次以上；(3)、诱导培养：从消毒后的材料上切取0.5～1.5cm带顶芽或带节的丹参嫩茎段接种到诱导培养基上培养小苗；所用培养基为MS+0.6mg/L6‑BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为8.0g/L，蔗糖浓度为30.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0；(4)、增殖培养：将诱导培养基上产生的无根小苗，剪成1～3个节的切断转接到继代增殖培养基中培养，所用增殖培养基为2/3MS+0.4mg/L6‑BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为6.0g/L，蔗糖浓度为27.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0；(5)、生根培养：将继代增殖培养基中长3～6cm的无根苗转接到生根培养基上，其余小芽继续培养；所用生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA+0.5mg/LNAA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为5.0g/L，蔗糖浓度为25.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0；以上诱导、增殖和生根培养，培养温度为22±1℃，光照强度14000lx～16000lx，光照时间不少于12h·d‑1；(6)、炼苗与移栽：无根苗在生根培养基中培养，当根长到2～5cm时，拿到培养室外常温下放置5～7天后打开瓶盖炼苗3～5天；经消毒清洗后移植到腐殖土、蛭石和珍珠岩的混合基质中，并置于复有遮阳网的塑料拱棚中栽培至新芽伸长成活；所用腐殖土、蛭石和珍珠岩的混合基质配比为2∶1∶1。