[发明专利]MSCs、ASCs诱导的5-HT神经细胞及其微囊化制备方法与应用

摘要

MSCs、ASCs诱导的5-HT神经细胞，包括以下步骤：(1)MSCs或ASSCs培养与传代：①原代培养；②消化传代；(2)前体诱导；(3)功能诱导；(4)性能稳定培养。MSCs、ASCs诱导的5-HT神经细胞的微囊化制备方法，采用ANano-P-ANano(海藻酸钠+纳米微粒-聚氨酸-海藻酸钠+纳米微粒)法，经静电微囊发生器使MSCs、ASCs诱导的5-HT神经细胞微囊化微囊化；每微囊含20个或30个5-HT神经细胞组，使微囊内的细胞充分接触微囊壁，易于附着与营养交换，即制成微囊化诱导型5-HT神经细胞。微囊化诱导型5-HT神经细胞的应用，用于制备治疗抑郁症的药物或抗癌药物。本发明的微囊化诱导型5-HT细胞，该微囊化人5-HT神经细胞中枢移植疗法，将为临床治疗抑郁症及抗癌治疗提供新的途径。

主权项

MSCs、ASCs诱导的5‑HT神经细胞，其特征在于，采用培养液将MSCs或ASSCs经分步培养诱导成为5‑HT神经细胞：包括以下步骤：(1)MSCs或ASSCs培养与传代：①原代培养；②消化传代；(2)前体诱导 采用前体诱导液培养与诱导，该前体诱导液，将3代培养2天的细胞加入所述前体诱导液，隔日换液，培养4天；将MSCs诱导成突起变细、胞体和胞核趋于变圆的前体细胞，细胞鉴定Nestin阳性；(3)功能诱导 采用功能诱导液培养与诱导，该功能诱导液，加隔离层成熟5‑HT神经细胞，隔日换液，培养6天，将前体细胞继续诱导成突起多、胞体和胞核变圆或多边形的5‑HT神经细胞，细胞鉴定MAP2(微管相关蛋白2)、NeuN(特异性神经元核蛋白)、5‑HT、TPH阳性、培养液放免测定其释放5‑HT浓度＞15ng/ml；(4)性能稳定培养 采用神经细胞培养液培养1天，细胞鉴定性能能稳定，且释放5‑HT的功能旺盛，即成为MSCs、ASCs诱导的5‑HT神经细胞。