[发明专利]一种生物被膜状态下猪链球菌总蛋白的提取方法

摘要

本发明涉及一种生物被膜状态下猪链球菌总蛋白的提取方法，包括以下步骤：（1）对处于生物被膜状态下猪链球菌的处理；（2）步骤（1）得到的清洗的菌体细胞以蔗糖缓冲液重悬，每毫升缓冲液中添加变溶菌素，在36.5—37.5℃的温度下孵育；（3）离心8—15min收集处于原生质体的细胞，以超声缓冲液重悬细胞，加入蛋白酶抑制剂,冰浴中超声破碎共60-100个循环；（4）随后在15-32℃的温度下孵育10-60min；（5）蛋白上清液加入5-15%TCA后冰浴；用预冷的丙酮洗蛋白，离心收集总蛋白，室温条件下干燥收集到的总蛋白，即获得所述细菌总蛋白。本发明的方法可广泛应用于各种处于生物被膜状态下细菌总蛋白的提取，特别是对于细菌生物被膜状态下细菌蛋白组学研究中，应用前景广阔。

主权项

一种生物被膜状态下猪链球菌总蛋白的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)对处于生物被膜状态下猪链球菌的处理，将上清移除，并用30‑70mM Tris/HCl PH7.5清洗2‑3遍后，刮下黏附于培养皿的处于生物被膜状态下的细菌菌体；细胞悬液被超声震荡5‑10min后，再用30‑70mM Tris/HCl PH 7.5清洗2‑3遍，并离心5‑15min收集菌体；(2)步骤(1)得到的清洗的菌体细胞以缓冲液重悬，每毫升缓冲液中添加500‑1000U/ml变溶菌素，在36.5‑37.5℃的温度下孵育60‑90分钟；(3)离心8‑15min收集处于原生质体的细胞，以超声缓冲液重悬细胞，加入蛋白酶抑制剂，冰浴中超声破碎共60‑100个循环；(4)随后在15‑32℃的温度下孵育10‑60min，25℃，10,000×g离心30min，除去细胞碎片和没有裂解的细菌；(5)蛋白上清液加入5‑15％TCA后冰浴15‑60min。用预冷的丙酮洗蛋白2‑3次后，离心5‑10min收集总蛋白，室温条件下干燥收集到的总蛋白，获得细菌总蛋白。