[发明专利]松花粉超临界萃取物中β-谷甾醇的含量的测定方法

摘要

本发明涉及松花粉超临界萃取物中活性物质β-谷甾醇的含量测定方法，运用气相色谱-质谱联用法和高效液相色谱法对甾醇类成分进行了分析测定。包括步骤如下：通过气相色谱-质谱联用分析，确定松花粉超临界萃取物中甾醇类的主要成分是β-谷甾醇；皂化法提取；高效液相色谱法测定β-谷甾醇的含量。本发明首次针对松花粉超临界萃取物中的甾醇类成分建立了简便可行的提取分析方法，手段先进、准确度、精密度良好，能通过β-谷甾醇的含量测定评价松花粉超临界萃取物的质量情况。

主权项

1.一种松花粉超临界萃取物中谷甾醇的含量的测定方法，其特征是它包括如下步骤：步骤1.标准储备液的制备：精密称取β-谷甾醇对照品，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，得100μg·ml^-1β-谷甾醇标准储备液；步骤2.供试样品溶液的制备：精密称取松花粉超临界萃取物2.0000g，置250ml三颈烧瓶中，加入40mL1molL^-1KOH无水乙醇溶液，于95℃皂化回流3h，加一倍蒸馏水稀释，用无水乙醚提取非皂化合物4~5次，合并提取液，经少量蒸馏水多次洗涤至中性，再用0.5molL^-1KOH水溶液充分振荡洗涤3次，最后用水洗成中性，加无水硫酸钠过夜脱水干燥，过滤，回收乙醚，得非皂化合物，称重，精密称取0.01g非皂化合物，用甲醇溶解，定容于10ml容量瓶，离心后取上清液稀释10倍，得供试样品溶液；步骤3.气相色谱-质谱条件：色谱条件：柱温：从240℃开始，以15℃·min^-1的速度升到285℃，并保持30min；气化温度为300℃；载气为高纯度氦气，流量1.0ml·min^-1；进样量：10μl；质谱条件：EI离子源，电子能量70Ev，离子源温度200℃；步骤4.β-谷甾醇的测定：取上述供试品溶液或β-谷甾醇标准溶液进行高效液相色谱分析，色谱条件：色谱柱：Shim-parkC₁₈柱（150mm×4.6mm）；流动相：甲醇；流速：1.0mlmin^-1；检测波长：210nm；进样量：20μl。