[发明专利]一种检测糖蛋白的方法

摘要

本发明是一种检测糖蛋白的方法，利用氧化锌量子点标记糖蛋白；同时在电解池中的芯片上固定化一层凝集素，在一系列已知浓度的待测糖蛋白溶液中，使标记了氧化锌量子点的糖蛋白和芯片上的凝集素进行特异性结合，把标记在糖蛋白上的氧化锌量子点连接到芯片上，再采用氧化锌量子点标记糖蛋白的溶出伏安法凝集素测定方法，因为标记的糖蛋白和待测的糖蛋白和凝集素结合能力的不同，不同浓度的待测糖蛋白会取代芯片上标记的糖蛋白，用溶出伏安法测定溶出的芯片上留下的锌离子的浓度，建立锌离子浓度与糖蛋白浓度之间的关系，从而确定待测糖蛋白浓度。

主权项

一种检测糖蛋白的方法，其特征在于利用氧化锌量子点标记糖蛋白；同时在电解池中的芯片上固定化一层凝集素，在一系列已知浓度的待测糖蛋白溶液中，使标记了氧化锌量子点的糖蛋白和芯片上的凝集素进行特异性结合，把标记在糖蛋白上的氧化锌量子点连接到芯片上，再采用氧化锌量子点标记糖蛋白的溶出伏安法凝集素测定方法，具体步骤描述为：1.）将0.5~5毫克氧化锌量子点分散到50~200微升100~200纳克／毫升的糖蛋白溶液中，在室温下震荡10min，离心，用pH值为6.8~7.5的磷酸盐缓冲溶液清洗三次；再加500 μL 1%  w/v牛血清蛋白，15~37oC下震荡10~30min，离心，用pH值为6.8~7.5的磷酸盐缓冲溶液清洗三次；最终分散于50~150 μL 0.05~0.1% v/v曲拉通 X‑100 pH值为6.8~7.5的磷酸盐缓冲溶液，不用时保存于冰箱保温层；2.）将二氧化硅片或玻璃片分别在丙酮、乙醇和水中分别超声5min，然后在60~80 °C 的NH4OH/H2O2 /H2O  1:1:5~7,v/v和HCl/H2O2/H2O  1:1:4~6,v/v分别浸泡5~10min；拿出后用清水洗干净，晾干；然后放入2~5%  v/v的3‑胺丙基乙氧基硅烷的乙醇溶液中浸泡 2~5 h，洗干净、晾干，再放入10~15mL 含有1~2%  v/v戊二醛pH值为6.8~7.5的磷酸盐缓冲溶液，于 4oC静置8~12 h，随后用去离子水清洗、晾干，待用；3.）将修饰后的芯片安装在一个孔径小于芯片边长的电解池中，将50 μL 含有1 ~2mg/mL凝集素pH值为6.8~7.5的磷酸盐缓冲溶液滴在上述处理好的芯片上, 并于 4oC静置8~12 h, 随后用去离子水清洗；然后将上述芯片用含0.5~1%  w/v 牛血清蛋白和0.05 ~0.1%  v/v吐温‑20 浸泡 0.5~1 h, 随后用去离子水清洗、待用；4.）取1步中 50~100 uL滴在3步制备好的芯片上，放置15~50min,用去离子水清洗芯片表面3次；5.）检测方法，将待测样品滴在4步中的芯片上，放置15~50min,用去离子水清洗芯片表面3次；6.）向电解池中注入pH值为1~3的盐酸溶液溶解第5步芯片上的留下的氧化锌量子点，井用pH1~3盐酸溶液洗三次，合并溶解液和洗液，加pH值为6.8~7.5的磷酸盐缓冲溶液至1~3毫升；7.）用铂电极为对电极，银/氯化银电极为参比电极，汞膜电极为工作电极，‑ 0.8~‑ 1.5伏富集90~150秒，用方波伏安法测锌的溶出峰，电位约在‑1.1伏；8.）改变第5步糖蛋白浓度，重复第7步，测定一系列糖蛋白浓度相对应的锌的溶出伏安峰的峰值电流，建立峰值电流与糖蛋白浓度之间的对应关系。