[发明专利]一种复合芽孢杆菌粉活菌含量的快速计数方法

摘要

本发明提供了一种复合芽孢杆菌粉活菌含量的快速计数方法，是将待测样品经过适当稀释之后，其中的芽孢杆菌充分分散成单个细胞，然后在无菌营养肉汤中通过孵育培养而生长繁殖，从而形成肉眼可见的浑浊液，再进一步通过芽孢染色确定最大稀释度浑浊液中含有大量的芽孢，最后确定待测样品的活菌总数。本发明与显微镜直接计数法相比因能够区分死菌体和活菌体而使活菌总数的测定结果更准确，与平板菌落计数法相比，操作更简单，更简易快速，很适合广大芽孢杆菌制剂生产从业者采用。

主权项

一种复合芽孢杆菌粉活菌含量的快速计数方法，其特征在于，包括如下步骤：1)样品的制备：无菌操作随机称取复合芽孢杆菌粉1g，加入盛有9mL无菌营养肉汤的50mL具塞离心管中，于漩涡振荡仪上振荡混匀制成1∶10的稀释母液；2)样品的稀释：无菌操作用1mL玻璃移液管吸取1mL 1∶10的稀释母液，加入盛有9mL无菌营养肉汤的50mL具塞离心管中，混匀成1∶102的稀释液，这样依次稀释，分别得到1∶103、1∶104、1∶105、1∶106、1∶107、1∶108、1∶109、1∶1010、1∶1011、1∶1012、1∶1013稀释度的稀释液；3)培养：将1∶10的稀释母液以及1∶102、1∶103、1∶104、1∶105、1∶106、1∶107、1∶108、1∶109、1∶1010、1∶1011、1∶1012、1∶1013的稀释液置于转速为200r/min、温度为35～37℃的温控摇床中，培养18‑24h；以盛有9mL无菌营养肉汤的50mL具塞离心管作为对照；4)测定：以盛有9mL无菌营养肉汤的50mL具塞离心管作为对照，用1mL玻璃移液管无菌操作吸取0.1mL培养18‑24h变浑浊的各稀释液采用Schaeffer‑Fulton氏染色法进行芽孢染色，显微镜观察有无绿色的芽孢；显微镜观察有绿色芽孢、且变浑浊的稀释液所对应的稀释度的倒数即为复合芽孢杆菌粉的活菌含量。