[发明专利]霍乱弧菌毒素基因多重实时荧光定量PCR检测试剂盒及方法

摘要

本发明提供了一种针对霍乱弧菌三种毒素基因的多重荧光定量PCR检测试剂盒和方法，根据霍乱毒素A亚单位基因(ctxA)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)、小带联结毒素基因(zot)设计特异性引物和探针，对霍乱弧菌菌体携带毒力基因情况进行准确、有效地甄别。本发明针对霍乱弧菌毒素基因提供了一种快速、准确、有效的多重荧光定量PCR检测方法和检测试剂盒，为及时采取有效措施对霍乱弧菌导致的大规模疫情进行防控提供了基础。

主权项

一种霍乱弧菌毒素基因多重实时荧光定量PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物和探针以及PCR反应试剂，其特征在于，所述特异性引物和探针由霍乱毒素A亚单位基因(ctxA)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)和小带联结毒素基因(zot)的特异性引物和探针组成：ctxA上游引物F1：5′‑AAC GTT AAT GAT GTA TTA GGG GCA T‑3′ctxA下游引物R1：5′‑GTT ACT GTAATA TCT ATC TCT GTA G‑3′ctxA探针P1：5′(HEX)‑ATA CTC CCA AAT ATA TGG ATG GT‑(BHQ1)‑3′ace上游引物F2：5′‑GGA GAT GTC CCA GAAAGT GAT TG‑3′ace下游引物R2：5′‑CGG GTC ATC AAA GCC TGAAG‑3′ace探针P2：5′‑(FAM)‑TGC TGC CTC CTC AAT ACA GCG GCT‑(BHQ1)‑3′zot上游引物F3：5′‑CAC CAC GGC TGG GAT ATC TG‑3′zot下游引物R3：5′‑CTATCT CCG CCG CCT CTC T‑3′zot探针P3：5′‑(Cal610)‑CAC GCC TAA CAT TGC CAA AGT GCA‑(BHQ2)‑3′其中FAM、HEX和Cal610为不同波长的荧光报告基团，BHQ1和BHQ2为荧光淬灭基团。