[发明专利]一种转基因抗棉铃虫和种仁无酚棉花的育种方法

摘要

本发明涉及一种转基因抗棉铃虫和种仁无酚棉花的育种方法，属于棉花育种领域。选用无腺体基因型为Gl2eGl2e的高产、低酚棉花品种湘棉18号为母本♀与高强力纤维、抗棉铃虫品系苏76149为父本♂杂交配组获得。本发明能够快速聚合高强纤维、高产、抗病与转Bt基因抗虫、显性无酚性状，显著地提高了选择效率，缩短育种年限。育成棉花新品种不仅对棉铃虫、老鼠表现稳定抗性，减少棉铃虫防治用药2~3次，降低生产成本，棉种贮运安全可靠；因不含棉酚及其类似物，种仁可作为人类食用油、食品和保健品的加工原料，每亩可为棉农增加经济收入1750元，在我国广大棉区具有广阔的推广应用前景。

主权项

1.一种转基因抗棉铃虫和种仁无酚棉花的培育方法，其特征在于：1)选用无腺体基因型为Gl₂^eGl₂^e的高产、低酚棉花品种湘棉18号为母本♀，与高强力纤维、抗棉铃虫品系苏76149为父本杂交配组；2)种植F₁群体，成熟期全部单株混收获得F₂；3)种植F₂、F₃、F₄，群体种植规模大于300株，三叶期通过对棉苗器官主茎、子叶、真叶和叶柄表面有、无色素腺体的鉴定，拔除有腺体棉苗，选择无腺体棉苗；六叶期在幼嫩真叶表面用毛笔点涂2000ppm卡那霉素溶液，一周后观察叶面是否出现黄白斑，淘汰呈现失绿斑的感卡那霉素植株，保留表现正常绿色的抗卡那霉素植株，成熟后全部单株混收；4)在种植密度36,000株/公顷条件下，F₅选择单株结铃数25个以上、平均铃重≥5.2克、衣分≥39％、抗卡那霉素的无腺体单株；5)种植F₆-F₇各世代株系，以感虫有酚品种苏棉22号为对照：室内棉铃虫抗性鉴定：抗虫性鉴定采取室内幼嫩叶片接虫法，于棉花蕾期在每个待鉴株系和对照品种群体中随机采回20张主茎嫩叶，每株最多采1片，每培养皿放2张嫩叶，用脱脂棉包紧叶柄基部保湿，向每个培养皿中接龄期相同的棉铃虫低龄幼虫6头，72h后观察统计死虫数、活虫数、活虫龄期及叶片被害程度；参照束春娥等1997年制定的标准，将叶片被害程度分成3个等级，I级：受害呈针头状不成片；II级：受害成小片，不超过叶面积的1/4；III级：被害成片，超过叶面积的1/4；将抗虫性分成3个等级，高抗：幼虫校正死亡率≥80％，叶片被害成I级；中抗：幼虫校正死亡率60％-79％，叶片被害成II级；低抗：幼虫校正死亡率＜59％，叶片被害成III级：选择抗性等级达到高抗的株系；种仁棉酚含量检测：成熟期收获植株无腺体、高抗棉铃虫株系子棉，获得棉子，采用国家标准GB/T13086-1991“饲料中游离棉酚的测定方法”检测入选株系种仁游离棉酚含量，选择棉酚含量低于无酚棉阈值0.0004％的株系，即为所获得的转基因抗棉铃虫、种仁无酚棉花的品系。