[发明专利]一种动物组织脂肪氧化酶活性的定量检测方法

摘要

本发明提供了一种动物组织脂肪氧化酶活性的定量检测方法，具体步骤为：(1)配制粗酶液和底物液；(2)于粗酶液中加入10倍体积的底物液，在20～30℃水浴缓慢震荡，反应20～30min，加入4倍粗酶液体积的无水乙醇终止反应，离心，取上清液0.5mL加入2mL无水乙醇，并用7.5mL质量浓度为60％乙醇稀释成测定液，并制备空白对照液，于234nm处测定吸光度；(3)绘制脂肪氧化酶酶活力与吸光度的标准曲线，将测得的吸光度与反应体系中脂肪氧化酶浓度相对应，根据脂肪氧化酶标准样品的酶活力单位，将不同样品的脂肪氧化酶活力进行量化。本发明的定量检测方法灵敏度高，稳定性和重现性好，操作方便，对设备要求低，且避免了底物液和粗酶液对测定带来的干扰。

主权项

一种动物组织的脂肪氧化酶活性的定量检测方法，包括如下步骤：(1)粗酶液和底物液的配制；所述粗酶液是：待测的动物组织经捣碎后，用磷酸盐缓冲溶液浸提，再经两次盐析、透析纯化后得到粗酶液；所述底物液是：由0.2g～0.3g吐温‑20和0.7mmol～0.8mmol亚油酸在pH值为6.5～7.5的磷酸缓冲液中配制成的底物液；(2)制备脂肪氧化酶样品的测定液及对照液，测定吸光度；将粗酶液中加入底物液中，加入4倍粗酶液体积的无水乙醇终止反应，离心，取上清液加入无水乙醇，并用质量浓度为60％乙醇稀释成测定液；在同样反应条件下制备空白对照液，于234nm处测定吸光度；(3)根据脂肪氧化酶酶活力与吸光度的标准曲线，得出酶活力；所述标准曲线是按照以下方案得出的：配制一系列不同浓度的脂肪氧化酶标准品酶液，在步骤(2)的同样反应条件下反应后，配制脂肪氧化酶标准品的测定液及对照液，于234nm处测定吸光度；以吸光度对脂肪氧化酶标准品浓度作图，得脂肪氧化酶吸光度标准曲线。