[发明专利]一种针对人TNF-α分子的自体疫苗的构建方法有效
| 申请号： | 201110303946.1 | 申请日： | 2011-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN102370979A | 公开（公告）日： | 2012-03-14 |
| 发明（设计）人： | 张英起;万一;薛晓畅;王增禄;赵宁 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | A61K39/395 | 分类号： | A61K39/395;C12N1/21;C12N15/62;C07K19/00;A61P19/02;A61P29/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京鼎佳达知识产权代理事务所(普通合伙) 11348 | 代理人： | 蒋常雪 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种体内诱导出针对人TNF-α分子的自身抗体的蛋白疫苗的构建方法，采用分步克隆方法构建hTNF-TT830-844，hTNF-HEL46-61，hTNF-PADRE的融合基因，并通过在天然人TNF基因中引入点突变(T439→A、C440→G)优化mRNA二级结构，融合基因克隆入pET22b原核表达载体，在大肠杆菌BL21菌株中获得高效表达。通过计算机辅助分析在hTNF的表位肽结构域之间引入三种T辅助细胞表位肽与hTNF-α融合而克服机体对于自体蛋白的免疫耐受，使得机体发生高水平的体液免疫反应，产生的高水平hTNF-α中和性多克隆抗体在体外可以中和hTNF-α对L929细胞的杀伤活性；其中hTNF-PADRE的免疫原性最强，在不使用免疫佐剂的情况下即可诱发高水平的抗体，该疫苗对于II型胶原诱导的类风湿性关节炎、LPS诱导的恶病质等小鼠模型具有良好的保护和治疗作用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 针对 tnf 分子 疫苗 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种体内诱导出针对人TNF‑α分子的自身抗体的蛋白疫苗的构建方法，其特征在于，将融合基因(TNF‑α1‑128‑PADRE‑TNF‑α142‑157)克隆入原核表达载体pET22b的Nde I和Sal I多克隆位点之间，将获得的重组表达载体转化大肠杆菌BL21，诱导后表达产物为包涵体，经包涵体洗涤，凝胶过滤柱层析，透析复性，即可获得纯化的目的融合蛋白，将该一种体内诱导出针对人TNF‑α分子的自身抗体的蛋白疫苗，在不使用佐剂的情况下免疫小鼠可产生高滴度抗人TNF‑α自身抗体，其中所述融合基因序列为：5’‑CATATGGTCAGATCATCTTCTCGAACCCCGAGTGACAAGCCTGTAGCCCATGTTGTAGCAAACCCTCAAGCTGAGGGGCAGCTCCAGTGGCTGAACCGCCGGGCCAATGCCCTCCTGGCCAATGGCGTGGAGCTGAGAGATAACCAGCTGGTGGTGCCATCAGAGGGCCTGTACCTCATCTACTCCCAGGTCCTCTTCAAGGGCCAAGGCTGCCCCTCCACCCATGTGCTCCTCACCCACACCATCAGCCGCATCGCCGTCTCCTACCAGACCAAGGTCAACCTCCTCTCTGCCATCAAGAGCCCCTGCCAGAGGGAGACCCCAGAGGGGGCTGAGGCCAAGCCCTGGTATGAGCCCATCTATCTGGGAGGGGTCTTCCAGCTGCAATTGGCTAAATTCGTTGGTGCATGGACTCTGAAAGCTGCAGCTCTCGACTTTGCCGAGAGTGGGCAGGTCTACTTTGGGATCATTGCCCTGTGAGTCGAC‑3’
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