[发明专利]一种提高黄芩毛状根抗低氧能力的方法

摘要

本发明涉及一种提高黄芩毛状根抗低氧能力的方法。本发明是通过构建含血红蛋白基因的植物表达载体，经农杆菌介导转化黄芩外植体或毛状根获得转基因黄芩毛状根。本发明获得的整合有vgb的黄芩毛状根能够在低溶氧环境下正常生长，在工业化生产过程中间歇通气即可满足毛状根需求，降低生产耗电、节约生产成本，本发明对培养黄芩毛状根生产黄芩药用成分、推进毛状根生产次生代谢产物的工业化进程有着重要意义。

主权项

一种提高黄芩毛状根抗低氧能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将vgb基因克隆到植物表达载体中，再将该植物表达载体转化农杆菌，筛选获得整合了vgb的农杆菌菌株；2)将无菌的黄芩外植体或毛状根接种于MS固体培养基上，25～26℃黑暗条件下预培养2～3d；在预培养的黄芩外植体或毛状根上划痕，加入经活化的整合了vgb的农杆菌，并添加浓度为10～200mg/L乙酰丁香酮，感染10～30min后，将黄芩外植体或毛状根转移到含10～50mg/L乙酰丁香酮的MS固体培养基上，25～26℃黑暗培养2～3d，再转移到含抗菌素的MS固体培养基上，25～26℃黑暗培养，诱发毛状根；3)待经农杆菌感染的黄芩外植体或毛状根上长出的毛状根达到2～3cm时，在无菌条件下切下毛状根，将其转移到含抗菌素的MS筛选培养基上，25～26℃黑暗培养，直至农杆菌生长被抑制，然后切取毛状根，获得转vgb基因黄芩毛状根；4)毛状根的继代培养：将切取的转vgb基因黄芩毛状根接种于MS固体培养基上，25～26℃避光培养，每20天继代培养一次；5)毛状根的液体培养：选取MS固体培养基继代培养2次以上、生长旺盛的毛状根，接种到MS液体培养基上，50～100r/min振荡、25～28℃避光培养。