[发明专利]利用同源重组构建多基因双元表达载体及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及基因工程领域，特别涉及利用同源重组构建多基因双元表达载体，所述多基因双元表达载体通过多克隆酶切位点，将单个基因或多个基因连成多基因聚合体形成同源重组中间载体，然后通过同源重组将单个基因或多基因聚合体加进基本双元载体中，所述同源重组可以多次进行，使基本双元载体的T-DNA的长度逐步加大，构成含有多基因的双元表达载体；本发明还公开了多基因双元表达载体的构建方法以及在植物转基因中的应用，本发明公开的多基因双元表达载体用于植物遗传改造中，能够同时转入多个靶基因，具有共转化效率高的优点。

主权项

利用同源重组构建多基因双元表达载体，其特征在于：所述多基因双元表达载体包括T DNA区、农杆菌复制子pVS1 REP、大肠杆菌复制子ColE1、原核抗性标记基因Kan，所述T DNA区由左边界、真核抗性标记基因nptII、原核抗性标记基因、至少两个靶基因和右边界顺序串联；所述多基因双元表达载体由基本双元载体和同源重组中间载体构成，所述基本双元载体包括T DNA区、农杆菌复制子pVS1 REP、大肠杆菌复制子ColE1、原核抗性标记基因Kan，所述T DNA区由左边界、真核抗性标记基因nptII、至少一个靶基因和右边界顺序串联；所述同源重组中间载体包括T DNA区、原核抗性标记基因Kan和大肠杆菌复制子ColE1，所述T DNA区包括左边界、原核抗性标记基因、至少一个靶基因；所述同源重组中间载体与所述基本双元载体的所述左边界、所述原核抗性标记基因Kan和所述大肠杆菌复制子ColE1顺序串联构成同源重组片段；所述同源重组中间载体靠近所述大肠杆菌复制子ColE1的所述靶基因与所述基本双元载体所述T DNA区靠近左边界一侧的所述靶基因有1.3 2.2 kb的序列相同构成同源重组片段，所述同源重组片段在根癌农杆菌中发生同源重组。