[发明专利]一种Viviparous1基因及其启动子表达载体的构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种Viviparous1基因及其启动子表达载体的构建方法和应用，其步骤：A、目的基因及其启动子的克隆：合成引物VpromoterF、VpromoterR以玉米851213-1×HE124B基因组DNA为模板，扩增出目的基因Vp1的启动子序列Vpromoter.剥离玉米胚，在含10μmABA??MS培养基中，摇床培养，提取mRNA，反转录合成cDNA，引物VgCF和VgCR，扩增出Vp1基因的编码序列Vp1cds，PCR产物经酶切后连接到pBluescript??SK+/-，测序；B、载体构建：以pBML-PMI载体为基础，Vpromoter和Vp1cds经酶切后，与pBML-PMI质粒连接，构建成pBML-PMI-Vp1表达载体。C、Viviparous??1基因及其启动子在小麦穗发芽抗性育种中的应用。利用农杆菌介导，转化小麦愈伤，获得转基因小麦。提高了ABA信号传递的敏感性，增强了小麦种子的休眠性，获得的转基因阳性材料穗发芽抗性显著提高。

主权项

一种Viviparous 1基因及其启动子的表达载体构建方法，其步骤是：A、目的基因的克隆：合成引物VpromoterF、VpromoterR以玉米851213 1×HE124B基因组DNA为模板，扩增出目的基因Vp1的启动子序列Vpromoter.剥离玉米胚，在含10μm ABA MS培养基中，200rpm摇床培养22 26h，提取mRNA，反转录合成cDNA，使用引物VgCF和VgCR，扩增出Vp1基因的编码序列Vp1cds，PCR产物Vpromoter经EcoRI和SmaI酶切后，Vp1cds经EcoRV和SacI酶切后连接到pBluescript SK+/ ，测序；B、载体构建：以pBML PMI载体为基础，Vpromoter和Vp1cds经酶切后，与pBML PMI质粒连接，构建成pBML PMI Vp 1表达载体；所述的引物VpromoterF：ACAGAATTCGGCGCGCCGTCGACACCATATTTAAGAAC；所述的引物VpromoterR：GCTCCCGGGCAGAGAGGCACGACGACAAA；所述的引物VgCF：CTGGATATCTCTCCTCCCTTTGTCGTCGT；所述的引物VgCR：TTCGAGCTCTGCTCTTTCAGATGCTCACCG。