[发明专利]一种液态奶中小分子有毒有害物质的通用快速检测方法

摘要

本发明公开了一种液态奶中小分子有毒有害物质的通用快速检测方法，特点是具体包括以下步骤：将液体牛奶样品进行简便通用的提取和净化，得到上样液的步骤；配置混合标准溶液和制作基质添加标准曲线的步骤，然后通过超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用测定液态奶中小分子有毒有害物质，最后进行浓度计算，优点是从小分子化合物一般共性出发，充分考虑到各种物质的溶解性、热稳定性、酸碱稳定性、极性强弱、共存稳定性等，开发出通用型快速前处理技术和UPLC-MS/MS电喷雾仪器测定技术，在满足检测限量要求的前提下，能给生产过程控制和食品检测工作带来显著的提高效率和降低检测成本的效果。

主权项

一种液态奶中小分子有毒有害物质的通用快速检测方法，其特征在于具体包括以下步骤：(1)样品前处理及提取净化将液体牛奶加入试管中，并在试管中加入保护剂和乙腈‑乙醇混合液，混匀后离心得到第一上清液，将第一上清液加入离心管中，并在离心管中加入乙腈‑乙醇混合液，充分混匀后离心得到第二上清液，将第二上清液转移至鸡心瓶中于40℃旋转蒸发至干，然后用乙腈‑乙醇‑水混合液定容得到样品液，将样品液摇匀后，通过0.22μm微孔滤膜过滤得到上样液；(2)混合标准溶液组成和基质标准曲线制备A.混合标准溶液组成氯霉素和β2‑激动剂类分别为20ng/mL，三聚氰胺、双聚氰胺、纳他霉素分别为2000ng/mL，阻断剂、甲状腺抑制剂、喹恶啉类、四环素类、喹诺酮类、磺胺类、β‑内酰胺、咪唑类、哒唑类、咖啡因、抗寄生虫药类、阿维菌素类、性激素类、皮质激素、喹恶啉类、真菌毒素类、大环内酯类、非甾类消炎药、β‑内酰胺、镇定剂、农药杀虫剂、染料类、雌激素、皮质激素、环境激素和农药类(除草剂)均为200ng/mL，‑18℃冷藏；B.基质标准曲线定量在4.0ml空白牛奶样品中加入混合标准溶液0μL，20μL，40μL，80μL，160μL，320μL，按步骤(1)所述的样品前处理及提取净化方法进行处理，以浓度为横坐标，仪器响应值为纵坐标，做基质加标标准曲线，作为试样处理液中待测物浓度定量的依据，其中，响应值＝标准品峰面积/标准品质量；(3)超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱联用测定A.高效液相分离液相条件为：a)色谱柱Acquity Waters HSS‑T3，2.1mm×100mm，1.8μm；b)色谱柱温度：40℃；c)如果质谱采用Run1正离子模式进行测定，进样量为将步骤(1)得到的上样液稀释4倍后取10μL；如果质谱采用Run2正离子模式和Run3负离子模式进行测定，进样量为步骤(1)得到的上样液10μL；d)流速：0.4mL/mine)如果质谱采用Run3负离子模式进行测定，那么选择流动相A1：2.5mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B1：甲醇；梯度洗脱程序(以体积百分比记)为：0‑6min，98‑0％A1；6‑10min，0％A1；10‑10.5min，0‑98％A1；10.5‑12min，98％A1；各洗脱时间段中均以流动相B1补足余下的％数；如果质谱采用Run1正离子模式和Run2正离子模式进行测定，那么选择流动相A2：0.1％甲酸水溶液，流动相B2：含0.1％甲酸的甲醇；梯度洗脱程序(以体积百分比记)为：0‑2.3min，98‑80％A2；2.3‑8min，80‑0％A2；8‑10min，0％A2；10‑10.5min，0‑98％A2；10.5‑12min，98％A2；各洗脱时间段中均以流动相B2补足余下的％数；f)流路切换：0～0.55min切换阀打开，色谱柱流出液进入废液，0.56min后开始质谱采集；B.质谱检测质谱条件为：a)采用电喷雾离子化电离源，毛细管电压：正离子、负离子电压分别为3.5kV和3.0kV；b)多通道监测方式MRM：c)离子源温度：150℃，去溶剂气温度：450℃；d)锥孔反吹气流速：50L/h；去溶剂流速：700L/he)碰撞气体：氩气3.3×10‑3毫巴g)分组方案：极性较强的药物选择Run1正离子模式下进行测定，Run1正离子模式定容溶剂为水、乙醇和乙腈按体积比为88∶6∶6的比例混合；极性偏弱药物选择Run2正离子模式下进行测定，Run2正离子模式定容溶剂为水、乙醇和乙腈按体积比为10∶5∶5的比例混合；极性和非极性的药物选择Run3负离子模式下进行测定，Run3负离子模式定容溶剂为水、乙醇和乙腈按体积比为10∶5∶5的比例混合；(4)浓度计算方法样品中待测物的含量根据如下计算公式(1)得到： X = C × V × 1000 m × 1000 . . . ( 1 ) 式中：X‑试样中待测物含量，单位为微克每公斤(μg/L)；C‑试样处理液中待测物浓度，根据基质标准曲线计算得到，单位为纳克每毫升(ng/mL)；V‑定容体积，单位为毫升(mL)；m‑试样体积，单位为毫升(mL)。