[发明专利]一种绵羊羊毛卷曲度的分子标记方法

摘要

一种绵羊羊毛卷曲度的分子标记方法，它涉及一种分子标记方法。方法：一、提取绵羊基因组DNA进行PCR扩增，然后酶切，得酶切产物；二、酶切产物电泳分离，根据电泳分离结果进行基因型判定；三、进行关联分析，并估计性状的最小二乘均值，结果为3种基因型中具有TT基因型和TC基因型个体的羊毛卷曲度显著高于CC基因型个体的羊毛卷曲度；四、依据步骤三中的结果将实验群体分为三种类型，即完成本发明。本发明可用于羊毛卷曲度和细度的分子标记辅助育种，可实现种羊的早期选种，出生后即可进行选留，从而降低选育成本、加速高品质细毛羊的育种进程；操作简单、准确度高、效率高、可自动化检测。

主权项

一种绵羊羊毛卷曲度的分子标记方法，其特征在于绵羊羊毛卷曲度的分子标记方法按以下步骤进行：一、采用苯酚/氯仿法从中国美利奴羊的耳组织中提取绵羊基因组DNA，根据绵羊DLX3基因3′UTR区228位点设计引物DLX3F1和DLX3R1，然后对绵羊基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，再用限制性内切酶Hpy188I酶切PCR扩增产物，获得酶切产物；二、使用浓度为2％～3％的琼脂糖凝胶对酶切产物进行电泳分离，然后根据电泳分离结果进行基因型判定，判定的标准：①电泳呈现两条带，大小为294bp和214bp，则绵羊DLX3基因3′UTR区228位点无突变，PCR扩增产物能被限制性内切酶Hpy188I完全切开，将其命名为TT基因型；②电泳呈现一条带，大小为508bp，则绵羊DLX3基因3′UTR区228位点发生突变，PCR扩增产物不能被限制性内切酶Hpy188I切开，将其命名为CC基因型；③电泳呈现三条带，大小为508bp、294bp和214bp，则绵羊DLX3基因3′UTR区228位点处于杂合状态，PCR扩增产物不能被限制性内切酶Hpy188I完全切开，将其命名为TC基因型；三、根据中国美利奴羊实验群体的特点，构建基因型效应统计模型：Y＝μ+G+L+A+e，其中Y为性状的观测值，μ为群体均值，G为基因型效应，L为品系效应，A为年龄效应，e为剩余值效应，然后利用JMP 4.0统计软件将基因型效应与羊毛性状进行关联分析，并估计性状的最小二乘均值，关联分析结果表明，绵羊DLX3基因3′UTR区228位点突变引起的基因型效应与羊毛卷曲度显著相关，P＝0.0106＜0.05，再进行多重比较，3种基因型中具有TT基因型和TC基因型个体的羊毛卷曲度显著高于CC基因型个体的羊毛卷曲度；四、依据基因型将中国美利奴羊实验群体分为三种类型，从而实现对绵羊羊毛卷曲度的分子标记辅助育种，即完成绵羊羊毛卷曲度的分子标记方法；其中步骤一中DLX3F1的核苷酸序列为：5’‑AACCTCTCACGAAGGAACCC‑3’，DLX3R1的核苷酸序列为：5′‑AGTCTCACGGTCCAATGTCTTT‑3′；步骤二中用限制性内切酶Hpy188I所识别的碱基序列为TCNGA；步骤三中中国美利奴羊实验群体的特点：①、783只中国美利奴羊为新疆军垦型；②、超细毛品系160只、毛用多胎品系137只、A品系171只、B品系166只、肉用多胎品系149只；③、均为同性别母羊；④、年龄为2～10岁。