[发明专利]一种检测绵羊支原体肺炎的方法

摘要

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种检测绵羊支原体肺炎的方法，提供与绵羊支原体肺炎(MP)相关的MBL基因启动子区CpG岛甲基化状态及其应用，还提供了检测绵羊支原体肺炎的方法，涉及MBL启动子区甲基化检测、人工感染验证；对绵羊MBL基因启动子区的甲基化状况检测选择重亚硫酸氢盐测序法，精确检测给定区域内每个CpG位点的甲基化状态及频率，发现3个与MBL水平相关的差异显著CpG甲基化位点，即CpG3、CpG4、CpG5，提示相对于攻毒前后MBL水平降低，MBL基因启动子区甲基化可能是血清MBL水平降低更显著的一个特征，该方法更敏感和准确的检测绵羊支原体肺炎感染和易感性个体，绵羊MBL基因启动子区甲基化与绵羊MP感染研究提供了完整的信息和科学依据。

主权项

一种检测绵羊支原体肺炎的方法，包括绵羊支原体肺炎(MP)相关的MBL基因启动子区CpG岛甲基化状态及其应用，其特征是：具体涉及MBL启动子区甲基化检测、人工感染验证MBL启动子区CpG岛甲基化与绵羊支原体肺炎及MBL水平的相关性，包括以下步骤：(1)样品采集和DNA提取，采用BSP甲基化检测技术对该基因启动子区序列进行甲基化检测，成功地检测了扩增出的234bp目的片段，甲基化分析发现，感染MP绵羊MBL基因启动子区中的6个CpG位点有5个为甲基化位点，而正常绵羊MBL基因启动子区中的6个CpG位点有4个发生甲基化，说明样品中基因启动子CpG岛的甲基化状态，与正常对照组相比甲基化状态不同，表示其个体患有绵羊支原体肺炎或支原体肺炎易感性高于正常绵羊，提供了更敏感和准确的绵羊支原体肺炎检测方法；(2)人工感染验证：人工感染验证，选用3月龄绵羊43只构建试验群体攻毒组37只，对照组6只，用绵羊肺炎支原体M.ovipneumonia标准株Y‑98对攻毒组进行气管内接种，运用BSP甲基化检测技术，成功检测了37只攻毒组绵羊及6只对照组绵羊中MBL基因启动子区甲基化及血清中MBL浓度水平情况，结果发现3个与MBL水平相关的差异显著CpG甲基化位点，即CpG3、CpG4、CpG5，提示相对于攻毒前后MBL水平降低，MBL基因启动子区甲基化可能是血清MBL水平降低更显著的一个特征，有望通过该方法更敏感和准确的检测绵羊支原体肺炎感染和易感性个体。