[发明专利]同时检测蜂王浆中氟胺氰菊酯、三唑醇和蝇毒磷残留量的方法

摘要

本发明涉及一种同时检测蜂王浆中氟胺氰菊酯、三唑醇和蝇毒磷残留量的方法。目前还没有一种能够同时检测蜂王浆中氟胺氰菊酯、三唑醇和蝇毒磷残留量的方法。本发明所用试剂包括色谱纯的乙睛、水、分析纯的无水硫酸钠、正丙醇、氟胺氰菊酯、三唑醇、蝇毒磷、分析纯的氨水和色谱纯的甲醇，该方法包括标准储备溶液配制工序、混合标准中间液配制工序、标准液配制工序、标准曲线制备工序、样品处理工序和样品检测工序。本发明操作简单，检测效率高，检测精度高，以信噪比S/N=3对应浓度确定方法的检出限分别为：三唑醇1.6µg/kg、蝇毒磷2.1µg/kg、氟胺氰菊酯2.0µg/kg，能同时检蜂王浆中氟胺氰菊酯、三唑醇和蝇毒磷残留量。

主权项

一种同时检测蜂王浆中氟胺氰菊酯、三唑醇和蝇毒磷残留量的方法，其特征在于：所述方法用到的试剂包括色谱纯的乙睛、水、分析纯的无水硫酸钠、正丙醇、氟胺氰菊酯、三唑醇、蝇毒磷、分析纯的氨水和色谱纯的甲醇，该方法包括标准储备溶液配制工序、混合标准中间液配制工序、标准液配制工序、标准曲线制备工序、样品处理工序和样品检测工序；所述标准储备溶液配制工序中，称取10mg氟胺氰菊酯、10mg三唑醇和10mg蝇毒磷分别置于一号10mL容量瓶、二号10mL容量瓶和三号10mL容量瓶中，向一号10mL容量瓶、二号10mL容量瓶和三号10mL容量瓶中加入乙腈并均定容至10ml分别制得浓度均为1000mg/kg的氟胺氰菊酯标准储备溶液、三唑醇标准储备溶液和蝇毒磷标准储备溶液；所述混合标准中间液配制工序中，分别取100µl氟胺氰菊酯标准储备溶液、100µl三唑醇标准储备溶液和100µl蝇毒磷标准储备溶液置于四号10mL容量瓶中，向四号10mL容量瓶中加入乙腈并定容至10ml制得浓度为10mg/kg的混合标准中间液；所述标准液配制工序中，取两份浓度为10mg/kg的混合标准中间液100µl，分别用乙腈配至浓度为100µg/kg的一号混合液和浓度为1000µg/kg的二号混合液；称取五份阴性基质样品，每份阴性基质样品的重量均为2g，将五份阴性基质样品分别置于一号瓶、二号瓶、三号瓶、四号瓶和五号瓶中；再向一号瓶、二号瓶和三号瓶中分别加入浓度为100µg/kg的一号混合液100µl、200µl和500µl，向四号瓶和五号瓶中分别加入浓度为1000µg/kg的二号混合液100µl和200µl；所述一号瓶、二号瓶、三号瓶、四号瓶和五号瓶中的液体先各自混合3‑5分钟，再各自静置15分钟后待用，该一号瓶、二号瓶、三号瓶、四号瓶和五号瓶中分别得到浓度为5µg/kg的一号标准液、浓度为10µg/kg的二号标准液、浓度为25µg/kg的三号标准液、浓度为50µg/kg的四号标准液和浓度为100µg/kg的五号标准液；所述标准曲线制备工序中，将浓度为5µg/kg的一号标准液、浓度为10µg/kg的二号标准液、浓度为25µg/kg的三号标准液、浓度为50µg/kg的四号标准液和浓度为100µg/kg的五号标准液均通过标准液处理步骤得到工作标准曲线制备样液，该工作标准曲线制备样液均通过标准液检测步骤得到工作标准曲线方程；所述标准液处理步骤中，称取2g±0.02g标准液置于50ml塑料离心管中，向50ml塑料离心管中加入5ml水混合均匀，再向50ml塑料离心管中加入300µl氨水混合均匀，然后向50ml塑料离心管中加人10mL乙腈并用力振摇3‑5min，使标准液完全溶解，再向50ml塑料离心管中加入8g无水硫酸钠并用力振摇3‑5min，然后在转速为6000rpm的条件下离心5min后，50ml塑料离心管中分为标准一次上清液和标准一次残渣，吸取50ml塑料离心管中的标准一次上清液后，再向50ml塑料离心管中加入5ml乙腈并用力振摇提取1‑3min，在转速为6000rpm的条件下离心5min后，50ml塑料离心管中分为标准二次上清液和标准二次残渣，吸取50ml塑料离心管中的标准二次上清液，将标准一次上清液和标准二次上清液合并成为标准总上清液；向标准总上清液中加入5ml正丙醇，在40℃的条件下减压浓缩至干得到标准上清液残渣；向标准上清液残渣中加入10ml体积百分比为50%的乙腈溶液后进行超声波溶解，得标准溶解液；取HLB小柱，并用5ml甲醇和5ml水对HLB小柱进行活化，将上述标准溶解液用0.22µm的滤膜过滤至10ml注射器中作为标准样液，该注射器接HLB小柱，使标准样液自然速度过HLB小柱，再用3ml水对HLB小柱进行洗柱，然后真空抽干HLB小柱10min；用10ml乙腈对HLB小柱进行洗脱并收集标准洗脱液，该标准洗脱液在40℃的条件下减压浓缩至干得到标准洗脱液残渣，向标准洗脱液残渣中加入1ml体积百分比为80%的乙腈溶液，待标准洗脱液残渣完全溶解后通过孔径为0.22µm的滤膜过滤得到标准洗脱样液，用标准洗脱样液进行上机检测，在LC/MS/MS中标准洗脱样液的进样量为20µl；所述标准液检测步骤中，检测仪器的条件为：液相色谱采用的色谱柱为intersil ODS C8‑3 150mm×2.1mm×3µm或相当者，进样量为20µl，流动相采用含体积百分比为0.1%甲酸的甲醇为有机相，以含体积百分比为0.1%的甲酸水溶液（含0.5mmoL/L乙酸铵）为水相；质谱条件中的TEM为200.00℃，辅助加热气GS1为60.00，干燥气GS2为50.00，气帘气CUR为10.00，碰撞气CAD为5.00，电喷雾电压IS为4500.00V，ihe为ON；将制备好的各标准样液进样，得到工作标准曲线方程y=kx+b，其中，y表示峰面积，x表示浓度，k和b表示回归方程中的系数，该工作标准曲线方程中的r>0.99，r表示回归方程中的相关系数；所述样品处理工序中，称取2g±0.02g蜂王浆样品置于50ml塑料离心管中，向50ml塑料离心管中加入5ml水混合均匀，再向50ml塑料离心管中加入300µl氨水混合均匀，然后向50ml塑料离心管中加人10mL乙腈并用力振摇3‑5min，使蜂王浆样品完全溶解，再向50ml塑料离心管中加入8g无水硫酸钠并用力振摇3‑5min，然后在转速为6000rpm的条件下离心5min后，50ml塑料离心管中分为一次上清液和一次残渣，吸取50ml塑料离心管中的一次上清液后，再向50ml塑料离心管中加入5ml乙腈并用力振摇提取1‑3min，在转速为6000rpm的条件下离心5min后，50ml塑料离心管中分为二次上清液和二次残渣，吸取50ml塑料离心管中的二次上清液，将一次上清液和二次上清液合并成为总上清液；向总上清液中加入5ml正丙醇，在40℃的条件下减压浓缩至干得到上清液残渣；向上清液残渣中加入10ml体积百分比为50%的乙腈溶液后进行超声波溶解，得溶解液；取HLB小柱，并用5ml甲醇和5ml水对HLB小柱进行活化，将上述溶解液用0.22µm的滤膜过滤至10ml注射器中作为样液，该注射器接HLB小柱，使样液自然速度过HLB小柱，再用3ml水对HLB小柱进行洗柱，然后真空抽干HLB小柱10min；用10ml乙腈对HLB小柱进行洗脱并收集洗脱液，该洗脱液在40℃的条件下减压浓缩至干得到洗脱液残渣，向洗脱液残渣中加入1ml体积百分比为80%的乙腈溶液，待洗脱液残渣完全溶解后通过孔径为0.22µm的滤膜过滤得到洗脱样液，用洗脱样液进行上机检测，在LC/MS/MS中洗脱样液的进样量为20µl；所述样品检测工序中，检测仪器的条件为：液相色谱采用的色谱柱为intersil ODS C8‑3 150mm×2.1mm×3µm或相当者，进样量为20µl，流动相采用含体积百分比为0.1%甲酸的甲醇为有机相，以含体积百分比为0.1%的甲酸水溶液（含0.5mmoL/L乙酸铵）为水相；质谱条件中的TEM为200.00℃，辅助加热气GS1为60.00，干燥气GS2为50.00，气帘气CUR为10.00，碰撞气CAD为5.00，电喷雾电压IS为4500.00V，ihe为ON；将制备好的样液进样，通过计算式X=C（V/m）分别计算得到蜂王浆中氟胺氰菊酯、三唑醇和蝇毒磷的残留量，计算式中的X表示样液中被测组分的含量，单位为微克每千克(µg/kg)，C表示从工作标准曲线方程上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每千克(µg/kg)，V表示样品进样液定容体积，单位为毫升(mL)，m表示蜂王浆样品的质量，单位为克(g)。