[发明专利]一种检测线粒体基因单倍型类群的方法及应用

摘要

本发明提供一种检测线粒体基因单倍型类群的方法，是利用寡核苷酸探针组检测mtDNA单倍型类群特征性位点的方法。采用Mx3005PReal-timePCRAlleleDiscrimination-SNP’s模式，以FAM、HEX荧光信号为检测信号，通过对FAM荧光信号的判定来检测特定的mtDNA突变。本发明方法设计合理，可快速、廉价、准确的进行mtDNA单倍型类群分型，尤其适用于较大样本量的分析；本发明设计的方法不受特定位点限制，可以对任意单倍型类群特征性位点进行检测。本发明方法可在确定任意个体mtDNA单倍型类群中的应用尤其对检测样本的核酸模板要求低，在法医学、考古学等领域的应用具有较大优势。

主权项

一种检测线粒体基因单倍型类群的方法，通过以下步骤实现：（1）筛选出主要线粒体基因单倍型类群及其主要亚型或任意目的单倍型的特征性位点，根据突变位点设计寡核苷酸探针及目的片段的上下游引物序列；（2）确定最佳PCR反应体系：体系总体积为25μl，其中含DNA模板2μl，目的片段的相应上下游引物各1.125μl，FAM荧光标记探针0.625μl，PCR反应液12.5μl和超纯水7.625μl；（3）确定定量 PCR扩增曲线：50℃ 2分钟， 95℃ 15分钟，40个循环扩增，每个循环包含以下过程：95℃ 30秒，再60℃ 45秒，再72℃ 1分钟；（4）检测：设定定量PCR系统信号起跳的阈值，根据信号是否起跳，扩增曲线图形综合判定结果，系统将自动生成检测结果及相关详细数据列表，并提供直观的散点图进一步说明检测结果。