[发明专利]筛选潜在抗阿留申病水貂的方法

摘要

本发明涉及一种筛选潜在抗阿留申病水貂的方法，其特征在于具体步骤如下：每年10-12月份，对后备育种群貂逐一编号，趾尖采取貂血样或取尿样；用改进的蛋白酶K-SDS酚法提取病毒核酸，用核酸助沉剂提高阿留申病毒DNA的得率；阿留申病毒与肠炎细小病毒联合PCR鉴别诊断阿留申病，同一貂血样进行阿留申病毒PCR与血清阿留申病毒抗体对流免疫电泳(CIEP)联合检测，每种方法重复检测两次，区分阿留申病毒及血清ADV抗体均为阴性的未感染貂，貂血清中阿留申病毒抗体阳性而阿留申病毒阴性的曾感染病毒的康复貂，阿留申病毒阳性的感染貂；或直接用PCR检测可区分阿留申病毒阳性貂、阿留申病毒阴性貂，可从貂群中淘汰阿留申病毒阳性的感染貂,保留阿留申病毒阴性的潜在抗阿留申病水貂—曾感染病毒的康复貂和未感染病毒貂，有效淘汰净化阿留申病貂，有利于增强貂群抗阿留申病，有效扩大育种群数量；为从抗病育种途径防制阿留申病打下基础。

主权项

筛选潜在抗阿留申病水貂的方法，其特征在于具体步骤如下：1.1每年10‑12月份前后，对后备留种群的貂逐一编号，趾尖采貂血样或取貂尿样；1.2用改进的蛋白酶K‑SDS酚法提取血样或尿样病毒核酸，用核酸助沉剂（Acryl Carrier）提高阿留申病毒ssDNA的得率；1.3阿留申病毒与肠炎细小病毒联合PCR鉴别诊断所用引物:par470：parF 5’tgcacaaattgtaacaccttggtc 3’, parR 5’cacctgttcttagtaagtgtactgg 3’；adv537：advF 5’catatactccagctgcgccgttg 3’,advR 5’cctgctggtattatccattcagga 3’；PCR试验条件：30ul体系引物终浓度par470 0.15uM，adv537 0.25uM，Mg2+ 2.0mM, dNTP  200 uM,Taq酶 1U；反应参数：94℃ 2min30sec；94℃ 32sec，53℃ 30sec，72 ℃ 40sec，32cycles；70℃ 4min 10℃ 1min；该PCR方法可检出最低病毒量低于0.3TCID50；用于准确鉴别血液中是否存在阿留申病毒；1.4同一貂血样进行阿留申病毒PCR检测与血清阿留申病毒抗体对流免疫电泳(CIEP)检测，每种方法重复检测两次，两种方法联合检测确定貂血液阿留申病毒及血清ADV 抗体情况；或直接用PCR检测，区分貂血液是否携带阿留申病毒。